各類細(xì)胞產(chǎn)品是我們做實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)。一支小小的細(xì)胞，從美國ATCC細(xì)胞庫，不遠(yuǎn)萬里來到中國，這是什么樣的精神？那么如何成功的復(fù)蘇、培養(yǎng)就尤為關(guān)鍵了。
中國微生物菌種查詢網(wǎng)（family998.com），是一家專業(yè)提供中國微生物菌種，標(biāo)準(zhǔn)菌種，質(zhì)控菌株,ATCC菌種,細(xì)胞系以及培養(yǎng)基等產(chǎn)品的查詢網(wǎng)站。下面小編將ATCC官方的《動物細(xì)胞培養(yǎng)指南》翻譯成中文，分成四個部分，教您從基礎(chǔ)開始復(fù)蘇，培養(yǎng)細(xì)胞。
關(guān)于ATCC
ATCC細(xì)胞系概述
ATCC的細(xì)胞系和雜交瘤細(xì)胞通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸。在收到凍存細(xì)胞后，很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點(diǎn)，需將細(xì)胞存儲在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細(xì)胞儲存在高于-130℃的溫度下，這會使細(xì)胞存活率迅速下降。
1，產(chǎn)品說明書
ATCC細(xì)胞株寄送時附帶說明書，說明書中有關(guān)于處理細(xì)胞的詳細(xì)信息。簡短版本的說明書，可以在ATCC網(wǎng)站上找到或致電ATCC的技術(shù)服務(wù)部門索?。?10-51291224）。產(chǎn)品說明書或COA文件中包含具體批次信息，如每管細(xì)胞的數(shù)量，建議分裂或傳代的比例，和已知細(xì)胞的傳代代次。
2，準(zhǔn)備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細(xì)胞時需要準(zhǔn)備合適的培養(yǎng)基，血清和細(xì)胞生長所需的添加劑。大部分產(chǎn)品，可以在訂購細(xì)胞系時從ATCC購買。ATCC在培養(yǎng)和保存細(xì)胞時也是使用相同的試劑。
注1：雖然大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時，細(xì)胞的性質(zhì)也會變化。因此，使用ATCC推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞會獲得最好的效果（見產(chǎn)品信息說明書）。
3，開啟凍存管
1.準(zhǔn)備一個培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）?！ ?br />
2.在37℃水浴中或細(xì)胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進(jìn)一步的操作均需在無菌操作臺中嚴(yán)格無菌條件下進(jìn)行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護(hù)劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以徹底混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時進(jìn)行傳代。（見注2）
注2：某些細(xì)胞系，如雜交瘤細(xì)胞，需要幾天的時間才能從凍存狀態(tài)完全復(fù)蘇。某些雜交瘤細(xì)胞在培養(yǎng)的第一天活力較差，并會產(chǎn)生細(xì)胞碎片。在此之后，細(xì)胞就會開始復(fù)蘇，并進(jìn)入指數(shù)增長。
4，培養(yǎng)瓶培養(yǎng)
某些ATCC細(xì)胞，是在培養(yǎng)瓶中以活細(xì)胞的形式運(yùn)輸?shù)摹＿@些培養(yǎng)瓶中會接種細(xì)胞，孵育并保證細(xì)胞能生長，然后補(bǔ)充滿培養(yǎng)基后再運(yùn)輸。
在收到培養(yǎng)瓶后，目視檢查培養(yǎng)基是否污染。包括異常的pH變化（苯酚紅變?yōu)辄S色或紫色），渾濁度，或有無顆粒。在低倍率（100×）的倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)基中是否有微生物污染以及細(xì)胞的形態(tài)。
如果細(xì)胞是單層貼壁生長：
1.無菌操作，取出大約5至10ml的運(yùn)輸培養(yǎng)基。運(yùn)輸培養(yǎng)基可以保存在4℃?zhèn)溆谩?br />
2.將培養(yǎng)瓶放在產(chǎn)品說明書中推薦的溫度和CO2濃度下培養(yǎng)（大多數(shù)細(xì)胞系為37℃與5%CO2）直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
如果細(xì)胞不貼壁或是懸浮狀態(tài)生長：
1.在無菌條件下，將培養(yǎng)瓶的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到離心管中。
2.在125×g轉(zhuǎn)速下離心5～10 min。
3.取出大約10 ml運(yùn)輸培養(yǎng)基的上清液，并重懸細(xì)胞。將取出的運(yùn)輸培養(yǎng)基儲存在4℃?zhèn)溆谩?br />
4.無菌條件下，轉(zhuǎn)移懸浮細(xì)胞到25 cm2或75 cm2的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶大小取決于細(xì)胞株（見產(chǎn)品說明書）。
5.按照產(chǎn)品說明書中推薦的溫度和CO2濃度培養(yǎng)細(xì)胞，直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞來源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物，是多種類型細(xì)胞的混合物，保留了其來源組織的特點(diǎn)。
一段時間后，原代培養(yǎng)的細(xì)胞會達(dá)到融合狀態(tài)，即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后，細(xì)胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個細(xì)胞并且傳代（分裂，傳代或轉(zhuǎn)移）。在第一次傳代以后，培養(yǎng)物通常被稱為一個細(xì)胞系。每一次傳代培養(yǎng)，細(xì)胞群體由于快速生長的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過克隆，從培養(yǎng)物中選出。
二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過幾代。它們只有有限的復(fù)制能力，并且在細(xì)胞倍增20至80次后開始減緩并最終停止分裂。最近的證據(jù)表明，某些細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞衰老與預(yù)計(jì)的復(fù)制性衰老不同，可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示，對某些物種的細(xì)胞系（尤其是人源的）即使生長在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時染色體末端（端粒）縮短調(diào)控的。
相反，傳代（或永生化）細(xì)胞具有無限增殖能力。這些細(xì)胞系通過多種手段中的其中一種來使細(xì)胞永生化或轉(zhuǎn)化。許多傳代細(xì)胞來自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細(xì)胞系是傳代的，只有少數(shù)如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細(xì)胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結(jié)腸細(xì)胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關(guān)于ATCC細(xì)胞永生化的信息可以在ATCC網(wǎng)站上查找。
正如以上提到的，細(xì)胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長（錨定依賴性）要么懸浮生長（非錨定依賴性）。細(xì)胞的生長和分裂，通常遵循一個由四個階段組成的特征性增長模式：停滯期，對數(shù)期（指數(shù)期），平穩(wěn)期（平臺期）和衰退期。
停滯期——將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶之后，細(xì)胞逐步恢復(fù)的同時，緩慢生長。
對數(shù)期（指數(shù)期）——細(xì)胞進(jìn)入一個對數(shù)生長的時期，一直持續(xù)到整個生長表面被占滿或細(xì)胞密度超過培養(yǎng)基提供營養(yǎng)的能力。
平穩(wěn)期——細(xì)胞增殖減慢或停止。
衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細(xì)胞數(shù)量不減少，細(xì)胞活力會下降，并出現(xiàn)細(xì)胞死亡。
為了確保活力，遺傳穩(wěn)定性和表型穩(wěn)定，必須使細(xì)胞保持在對數(shù)期。這意味著細(xì)胞需要在進(jìn)入平穩(wěn)增長階段之前，或在單層細(xì)胞長成100%融合之前，或在懸浮細(xì)胞達(dá)到推薦的最大細(xì)胞密度之前定期進(jìn)行傳代培養(yǎng)。為每個細(xì)胞系繪制生長曲線，對于測定該細(xì)胞系的生長特性是必要的。
任何ATCC細(xì)胞系的生長和增殖的詳細(xì)信息，參見運(yùn)輸包裝里提供的具體細(xì)胞系的產(chǎn)品說明書。簡短版本的說明書，也可以在ATCC網(wǎng)站上找到，或致電中國微生物菌種查詢網(wǎng)（family998.com）010-51291224咨詢。