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1 目的
規(guī)定滅菌工序質(zhì)量監(jiān)測(cè)點(diǎn)的檢驗(yàn)方法，有效的控制該工序質(zhì)量。
2 范圍
本方法適用于滅菌工序生物指示菌片的無菌檢驗(yàn)。
3 檢驗(yàn)方法
3.1 原理
將枯草桿菌黑色變種芽胞菌片（Atcc9372以下簡稱“菌片”）置培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的溫度下培養(yǎng)，觀察細(xì)菌是否生長。
3.2 培養(yǎng)基制備
3.2.1 在配制培養(yǎng)基前，先配少量培養(yǎng)基觀察其滅菌后是否有渾濁，長菌情況是否良好，合格后方可大量配制。在更換廠牌號(hào)時(shí)應(yīng)重試。
3.2.2 制備各種培養(yǎng)基時(shí)，可用2mol/L鹽酸或2mol/L氫氧化鈉溶液適量調(diào)節(jié)PH值，使滅菌后的PH值在規(guī)定范圍內(nèi)。
3.2.3 營養(yǎng)肉湯的配制：按瓶裝上的說明書要求配制，溶解，攪拌均勻，每支試管分裝15-20培養(yǎng)基，滅菌.
3.2.4 在使用前，培養(yǎng)基須經(jīng)35℃±2℃培養(yǎng)48h。
3.2.5制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2℃～25℃、避光的環(huán)境。培養(yǎng)基若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。
3.3 儀器與設(shè)備
超凈工作臺(tái)、高壓蒸氣滅菌器、9cm直徑雙碟、鑷子、剪刀。
3.4 試驗(yàn)前準(zhǔn)備
3.4.1 器具滅菌
與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃ 30mim，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃ 2h。
3.4.2 無菌室要求
無菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)局部應(yīng)符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求。
a)無菌室內(nèi)除定期用甲醛加高錳酸鉀（或甲醛蒸汽）消毒外，每次操作前用75%灑精或消毒溶液擦試工作臺(tái)面及一些可能污染的死角。用紫外燈殺菌至少30min。在每次操作完畢后，同樣用上述液體擦試工作面。
b)無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法如下：取內(nèi)徑90mm雙碟，無菌操作注入融化的大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基20ml，制成平板，先在30℃～35℃培養(yǎng)48h證明無菌后，取雙碟平板3只，在無菌室操作臺(tái)內(nèi)平均放置，打開碟蓋，暴露30mim后蓋好，置30℃～35℃培養(yǎng)48h后取出檢查，3只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個(gè)。
c)無菌試驗(yàn)過程中也需要檢查無菌室的菌落數(shù)，方法同上。在試驗(yàn)開始進(jìn)行時(shí)，打開碟蓋，至試驗(yàn)結(jié)束蓋好，照上法培養(yǎng)，應(yīng)符合上述要求。
3.5 試驗(yàn)方法
按無菌操作法，每一滅菌柜將已滅菌的菌片（枯草桿菌黑色變?cè)垩堪鸄tcc9372，含菌量2.4×106）分別接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（1個(gè)菌片/管），另取2管營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，1管接種1個(gè)未滅菌的菌片，供作陽性對(duì)照，另1管作為陰性對(duì)照。
接種后，上述接種后的培養(yǎng)基按規(guī)定的溫度培養(yǎng)7天。
3.6 結(jié)果判定
3.6.1 如培養(yǎng)基均為澄清的藍(lán)色或顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判定為合格。
3.6.2 如培養(yǎng)基中任何一管藍(lán)色消失、顯渾濁或有菌膜并確證為有菌生長，判定為不合格。
3.6.3 監(jiān)測(cè)結(jié)果只有在陽性對(duì)照的生物指示劑有菌生長時(shí)才有效。除陽性對(duì)照管外，其他各管均不得有菌生長，否則應(yīng)判為不合格。
3.6.4 如果出現(xiàn)陽性結(jié)果，增加生物指示劑放置數(shù)量和位置點(diǎn)數(shù)，重復(fù)滅菌周期。如果再次出現(xiàn)陽性結(jié)果，對(duì)滅菌柜、操作過程等相關(guān)因素進(jìn)行調(diào)查。