關(guān)于食用菌菌種脫毒技術(shù)主要有以下四種方式：一、菌絲尖端脫毒法；二、U型管脫毒法；三、斷橋脫毒法；四、原基組織脫毒法。上述方法各有利弊，我們先了解一下各種方法的具體操作方式，再來為大家分析各種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。
1，菌絲尖端脫毒法
使用規(guī)格為90毫米或110毫米的培養(yǎng)皿。無此規(guī)格培養(yǎng)皿時，也可改用規(guī)格為25毫米×200毫米的大型試管，但操作不太方便。 先按常規(guī)制備母種培養(yǎng)基，裝入三角瓶，棉塞封口，加皮紙包封；同時將培養(yǎng)皿洗凈后用牛皮紙包好。二者同時進(jìn)行滅菌處理。121℃下滅菌30分鐘，待滅菌鍋內(nèi)壓力為零時，取出滅菌物，放入事先消毒的接種箱。打開牛皮紙包封，一手持培養(yǎng)皿，一手持三角瓶，利用手指調(diào)控使培養(yǎng)皿上蓋開啟約1～2厘米，倒入培養(yǎng)基液體約10～20毫升，蓋嚴(yán)。將培養(yǎng)皿平置，冷卻后成一光滑平面，俗稱平板 。平板冷卻至30℃以下時，接入待脫毒菌種。接種方法：挑取米粒大小的一塊種源，接入平板邊緣。接種后置于規(guī)定溫度下培養(yǎng)〔視品種調(diào)控溫度）。當(dāng)菌絲萌發(fā)至最長為2厘米時，用尖刃接種工具切取菌絲尖端0.4毫米以下，接入新制平板上。此為1次脫毒。一般可連續(xù)脫毒3～4次。脫毒次數(shù)越多，脫毒效果就越有保證。
編者注：上述原文中要求切取菌絲尖端1毫米，實際情況證明在菌種脫毒中只有切取0.4毫米以下才能到有效脫毒目的。這是國際公認(rèn)的安全脫毒范圍。這樣的長度一般人手工切取成功率極低。
2，無底試管脫毒法
原材料準(zhǔn)備
1、無底試管：把待用的試管底部用玻璃刀劃掉，使其成為兩端都敞口的無底試管。
2、培養(yǎng)基配制：取木屑另加1%石灰、0.5%尿素以及適量水配成含水量55%的培養(yǎng)基。
3、其它：高壓滅菌鍋、棉塞、比上述無底試管略小的試管一根（如果無底試管直徑為20mm，那這根試管直接則為18mm左右）。
操作步驟
取上述培養(yǎng)基分成兩小斷裝入無底試管中，具體方法：裝料時先用直徑小一點(diǎn)的試管插入無底試管內(nèi)4cm處，然后裝料約2厘米后壓實；接著裝另一端，用手把培養(yǎng)料握成團(tuán)，然后把試管口對著培養(yǎng)料團(tuán)插進(jìn)去2cm左右，再把另一頭直徑小一點(diǎn)的試管取下來從這一頭把培養(yǎng)料向中間推進(jìn)去，距離另一端培養(yǎng)料約1cm處，最后兩頭用棉塞封口.
注意：高壓鍋滅菌時試管要橫放，不能豎放，其它操作按常規(guī).
接種時把母種接到任何一端就行了，等平菇菌絲長滿了一端培養(yǎng)基后，其爬壁菌絲會隔空長到另一端培養(yǎng)基上，等到長滿另一端后就可以取另一前端菌絲接種了。
本方法特點(diǎn)：1、培養(yǎng)料的一高一低（高堿、低營養(yǎng)）抑制了其它微生物的生長；2、利用平菇菌絲爬壁力強(qiáng)而細(xì)菌不能爬壁的特點(diǎn)。經(jīng)過這樣處理后再轉(zhuǎn)接出來的菌絲，純正、粗壯有力。大家不妨一試。
編者注：U型管脫毒法，比無底試管更好用一些，只要在U型管兩端裝入配制好的培養(yǎng)基，其它環(huán)節(jié)按照無底試管操作即可。簡便易行，上圖為我們脫毒的效果照片，可以清晰的看到試管中兩邊菌比生長狀態(tài)的強(qiáng)弱差距。
3，斷橋脫毒法
任何一個好的平菇品種，如果連續(xù)栽培，也會出現(xiàn)退化、變異現(xiàn)象。山東省壽光市田柳鎮(zhèn)閆家村菇農(nóng)李法升依據(jù)馬鈴薯脫毒種連年種植不退化、變異的原理，琢磨出了對平菇菌種進(jìn)行脫毒提純復(fù)壯的好方法，有效防止了品種的退化和變異。 他的辦法是用常規(guī)法制備PDA培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下，用接種耙把培養(yǎng)基斜面最前端較薄的培養(yǎng)基斷開約1厘米，把待接母種接在試管中間培養(yǎng)基上，當(dāng)菌絲長到斷開處時，則會繼續(xù)伸長，穿越斷開處，伸入前端的小塊培養(yǎng)基上，經(jīng)過斷裂又伸長，菌絲顯得格外粗壯、有力。轉(zhuǎn)接時，挑取小塊培養(yǎng)基最前端的一塊組織，按常規(guī)接種，這樣經(jīng)過四次尖端挑取培養(yǎng)，便可甩掉病毒。
李法升給這種簡單的脫毒方法取了一個名字： “斷橋式脫毒技術(shù)”。采用這種辦法培養(yǎng)的平菇菌種發(fā)菌快，產(chǎn)量明顯提高。在污染嚴(yán)重的年份，能避免因雜菌污染造成減產(chǎn)。他還建議，在使用該方法的同時，也要改良常規(guī)PDA培養(yǎng)基的配方作為脫毒的配套措施，只有這樣，才能培養(yǎng)出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的平菇菌種。
編者注：斷橋脫毒法：很多食用菌相關(guān)網(wǎng)站都有刊載上文，實際上通過這種所謂的“斷橋”方式很難達(dá)到理想的脫毒效果，因為在劃開試管內(nèi)培養(yǎng)基時粘著在試管壁的營養(yǎng)物質(zhì)是起不到“斷”的作用。如果能免脫毒成功還是要取決于切取尖端菌絲的過程。
4，原基組織脫毒法
該技術(shù)最大程度革除了原有組織分離時子實體處于生長中后期，攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端，真正實現(xiàn)了分離尖端組織的脫毒目的。
具體操作為： 常規(guī)配制基料，調(diào)破氮比為30∶1。碳氮比不可小于25∶1，以免菌絲過度旺盛生長結(jié)成菌皮，不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈、備用。準(zhǔn)備數(shù)塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時，從瓶口處鋪上一層紗布，用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下，使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進(jìn)行。待菌絲發(fā)滿瓶后，施行溫差、濕差、光照等刺激，一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時原基的形態(tài)是白疙瘩 。待原基高至1厘米時，即可進(jìn)行脫毒分離。 將菌瓶用75％酒精擦洗后，移入已消毒的接種箱，箱內(nèi)不再進(jìn)行常規(guī)熏蒸。同時準(zhǔn)備接種針（或接種釣）、多個刀片（以備交替使用），與菌瓶一同放入接種箱中，噴灑新潔爾滅以確保無菌操作。兩手用75％酒精擦洗，伸入接種箱，將刀片進(jìn)行灼燒滅菌后手持冷卻。打開菌瓶封口，兩手配合用無菌鑷子取出原基。由于料面覆蓋一層紗布，故不會將基料帶出，操作方便。用刀片將原基表層削去約1毫米，然后用尖刃刀片將原基劃切，使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。
操作要點(diǎn)：一是用刀片進(jìn)行削、切時，每切一刀須更換一次刀片；二是分離塊接入時須靠邊緣投放，可接在平板的邊緣或試管的最前部，一般不居中接入。
5，干擾素脫毒法
在食用菌菌種脫毒應(yīng)用干擾素目前僅停留在理論上，目前還有待進(jìn)一步研究，這將是未來食用菌菌種脫毒的一個新方向。
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