改良Y培養(yǎng)基的原理與使用方法及結(jié)果判讀與質(zhì)量控制！
小楊 / 2026-02-07 18:16:30
改良Y培養(yǎng)基是用于
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌選擇性分離的固體培養(yǎng)基，核心原理是通過營養(yǎng)供給、選擇性抑制雜菌、促進(jìn)目標(biāo)菌生長及菌落顯色，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)分離。以下從原理、配方、制備、接種培養(yǎng)、結(jié)果判讀及注意事項(xiàng)展開說明。
一、核心原理
營養(yǎng)供給：蛋白胨和水解酪蛋白提供氮源、碳源及生長因子；乳糖作為可發(fā)酵碳源；氯化鈉維持滲透壓穩(wěn)定。
選擇性抑制：去氧膽酸鈉與三號膽鹽協(xié)同抑制革蘭氏陽性菌生長，降低雜菌干擾。
促生長作用：丙酮酸鈉與草酸鈉可刺激小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌增殖，提升檢出率。
顯色與凝固：孟加拉紅作為著色劑，便于觀察菌落；瓊脂為凝固劑，形成固體培養(yǎng)表面。
pH 適配：pH 7.4±0.2（25℃），適配目標(biāo)菌生長需求。
二、配方組成（g/L）
成分 含量 作用
蛋白胨 15.0 氮源、碳源、生長因子
水解酪蛋白 5.0 補(bǔ)充氮源與微量元素
氯化鈉 5.0 維持滲透壓
乳糖 10.0 可發(fā)酵碳源
草酸鈉 2.0 促進(jìn)目標(biāo)菌生長
去氧膽酸鈉 6.0 抑制革蘭氏陽性菌
三號膽鹽 5.0 協(xié)同抑制革蘭氏陽性菌
丙酮酸鈉 2.0 刺激目標(biāo)菌生長
孟加拉紅 0.04 著色劑，輔助菌落觀察
瓊脂 17.0 凝固劑，形成固體平板
三、制備方法
稱量溶解：稱取 67.0g 干粉，加入 1L 蒸餾水或去離子水，加熱煮沸至完全溶解，避免結(jié)塊。
分裝滅菌：分裝至三角瓶，121℃高壓滅菌 15 分鐘，滅菌后搖勻防止瓊脂沉淀。
倒平板：冷卻至 45-50℃時(shí)，在超凈工作臺中傾入無菌平皿，厚度約 3-5mm，凝固后備用。
保存：密封后 4-8℃冷藏，避免光照，有效期通常為 1-2 周，使用前恢復(fù)至室溫 10-20 分鐘。
四、接種與培養(yǎng)
樣品處理：液體樣品梯度稀釋；固體樣品均質(zhì)后稀釋，選擇合適稀釋度。
接種方式：涂布法（取 0.1mL 稀釋液均勻涂布）或劃線法（用于純化），每種稀釋度至少 2 個(gè)平行平板。
培養(yǎng)條件：26±1℃倒置培養(yǎng) 48±2 小時(shí)，避免冷凝水影響菌落形態(tài)。
五、結(jié)果判讀與質(zhì)控
典型菌落特征：
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌菌落無色透明、光滑、不粘稠，直徑約 0.5-1.0mm；若發(fā)酵乳糖，菌落可能呈粉紅色（因孟加拉紅顯色）。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
六、注意事項(xiàng)
滅菌與溶解：確保完全溶解后滅菌，滅菌后及時(shí)搖勻，防止瓊脂分層。
溫度控制：倒平板溫度不宜過高（避免燙傷）或過低（防止提前凝固）；培養(yǎng)溫度嚴(yán)格控制在 26±1℃，避免影響目標(biāo)菌生長。
污染防控：全程無菌操作，制備好的平板避免污染，冷藏保存時(shí)密封防潮。
結(jié)果復(fù)核：疑似菌落需通過生化鑒定或分子生物學(xué)方法確認(rèn)，避免假陽性。
七、常見問題與解決
問題 可能原因 解決方案
雜菌過多 抑制成分不足或滅菌不徹底 檢查配方，確保去氧膽酸鈉/三號膽鹽添加量；延長滅菌時(shí)間或檢查滅菌器壓力
目標(biāo)菌生長差 促生長成分不足或 pH 異常 核對丙酮酸鈉/草酸鈉用量；滅菌后檢測 pH，必要時(shí)用 NaOH/HCl 微調(diào)至 7.4±0.2
菌落不透明 乳糖發(fā)酵過度或孟加拉紅濃度異常 減少培養(yǎng)時(shí)間；檢查孟加拉紅添加量，確保為 0.04g/L
改良Y培養(yǎng)基通過營養(yǎng)、抑制、促生長與顯色的協(xié)同作用，可高效分離
小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌，適用于食品、臨床樣品的微生物檢測。嚴(yán)格遵循制備與培養(yǎng)規(guī)范，結(jié)合質(zhì)控與復(fù)核，能保障結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。
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