乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基的實驗原理與方法及注意事項與結(jié)果判斷！
小楊 / 2026-02-06 09:40:11
一、實驗原理
1、培養(yǎng)基成分與作用
乳糖：唯一或主要可發(fā)酵碳源。
蛋白胨：提供氮源、氨基酸、生長因子。
指示劑：常用酚紅（phenol red），也有用溴甲酚紫等。
中性/堿性：紅色/紫紅色
酸性（pH < 6.8 左右）：黃色
倒置杜氏小管（Durham tube）：用于收集氣體，判斷是否產(chǎn)氣。
緩沖鹽：維持初始 pH，一般調(diào)至7.2–7.4左右。
2、生化反應(yīng)原理
細(xì)菌若具有β- 半乳糖苷酶等相關(guān)酶系 → 可分解乳糖 → 產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸。
產(chǎn)酸 → 培養(yǎng)基 pH 下降 → 指示劑由紅→黃。
部分細(xì)菌在發(fā)酵產(chǎn)酸的同時，會產(chǎn)生氣體（如 H?、CO?） → 杜氏小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡/空泡。
不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌：
利用蛋白胨等產(chǎn)堿或不明顯產(chǎn)酸 → 顏色不變或偏紅/紫紅；
一般無氣泡。
一句話總結(jié)：看顏色（產(chǎn)酸）+ 看氣泡（產(chǎn)氣），判斷是否乳糖發(fā)酵型細(xì)菌。
二、實驗方法（簡要）
制備乳糖發(fā)酵管（含乳糖、蛋白胨、酚紅、倒置杜氏小管），滅菌備用。
用接種環(huán)取待檢菌純培養(yǎng)物，接種于乳糖發(fā)酵管。
37℃ 培養(yǎng) 18–24 h，必要時可延長至 48 h。
觀察：
培養(yǎng)基顏色變化；
杜氏小管內(nèi)有無氣泡。
三、實驗結(jié)果判斷
1、結(jié)果分級（常用）
產(chǎn)酸產(chǎn)氣（⊕ / A+G）
現(xiàn)象：培養(yǎng)基變黃，杜氏小管內(nèi)有明顯氣泡。
含義：該菌能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。
典型菌：大腸埃希菌（E. coli）等大腸菌群。
產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（+ / A）
現(xiàn)象：培養(yǎng)基變黃，杜氏小管無氣泡。
含義：能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，但不產(chǎn)氣。
典型菌：部分克雷伯菌、腸桿菌或某些乳酸菌等（視具體菌種而定）。
不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（- /-）
現(xiàn)象：顏色仍為紅色/紫紅色，杜氏小管無氣泡。
含義：不發(fā)酵乳糖。
有時會出現(xiàn)產(chǎn)堿/不變色但渾濁生長：說明細(xì)菌生長但不利用乳糖產(chǎn)酸，仍判為乳糖陰性。
2、結(jié)果記錄示例（可直接寫進(jìn)報告）
大腸埃希菌：乳糖發(fā)酵（+），產(chǎn)酸產(chǎn)氣
傷寒沙門菌：乳糖發(fā)酵（-），不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣
志賀菌：乳糖發(fā)酵（-），不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣
四、注意事項（寫報告常用）
必須設(shè)未接種空白管作對照，排除培養(yǎng)基本身變色或污染。
杜氏小管必須完全倒置、無氣泡，否則會誤判產(chǎn)氣。
培養(yǎng)時間不宜過長，避免細(xì)菌后期分解蛋白胨產(chǎn)堿，導(dǎo)致“回變”（黃→紅）。
顏色判斷以整管均勻變黃為準(zhǔn)，局部輕微變色一般不計。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因為此，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法及具體操作規(guī)程！
下一篇：改良Y培養(yǎng)基的原理與使用方法及結(jié)果判讀與質(zhì)量控制！