克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基的使用方法與注意事項及結果判定！
小楊 / 2025-12-25 09:26:29
1、培養(yǎng)基準備
從冷藏環(huán)境取出培養(yǎng)基斜面，室溫放置 10–15 分鐘復溫；使用前需檢查外觀，確認無結塊、變色、渾濁、霉斑或氣泡，未接種對照斜面顏色應為黃橙色（pH 6.8±0.2）。
若為干粉配制，按配方稱取定量粉末，加蒸餾水溶解，加熱煮沸至完全澄清，分裝試管（每管 3–5 mL），121℃高壓滅菌 15 分鐘，滅菌后趁熱擺成斜面（斜面長度約占試管長度的 1/2–2/3），冷卻后備用。
2、接種操作（無菌操作）
挑取新鮮（培養(yǎng) 18–24 小時）的純培養(yǎng)單菌落，避免使用老化菌落（易導致假陰性）。
用接種環(huán)輕劃培養(yǎng)基斜面表面（僅劃表面，禁止穿刺），接種量宜少不宜多，過量接種會干擾結果判定。
3、培養(yǎng)條件
將接種后的試管置于 35±2℃ 需氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24–48 小時；若 24 小時無明顯生長或顏色變化，可延長培養(yǎng)至 72 小時（部分菌株代謝較慢）。
4、結果判定
反應結果 生長情況 培養(yǎng)基顏色變化 判定結論
陽性 斜面有明顯菌苔生長 黃橙色 → 玫紅色 菌株可利用檸檬酸鹽
陰性 斜面無生長或僅有微弱痕跡 保持黃橙色不變 菌株不能利用檸檬酸鹽
無效 空白對照變色/污染 培養(yǎng)基失效或操作污染，試驗重做
1、無菌操作嚴格化
接種全程需在超凈工作臺內進行，接種環(huán)、試管口需充分灼燒滅菌，避免環(huán)境雜菌污染，否則易出現(xiàn)假陽性。
不同菌株接種需更換接種環(huán)，防止交叉污染。
2、菌株與接種要求
必須使用新鮮純菌落，老化菌落代謝活力下降，可能無法有效利用檸檬酸鹽，導致假陰性。
接種時僅輕劃斜面表面，穿刺會破壞培養(yǎng)基結構，且可能因局部營養(yǎng)富集干擾結果。
3、培養(yǎng)條件把控
該試驗為需氧代謝，試管塞不可過緊，否則氧氣不足會抑制菌株生長與代謝。
培養(yǎng)溫度需穩(wěn)定在 35±2℃，溫度過高或過低會影響酶活性，導致結果偏差。
4、結果判讀時效性
不可超過 72 小時判讀，培養(yǎng)時間過長，培養(yǎng)基可能因水分蒸發(fā)、pH 自發(fā)改變而變色，干擾判定。
判讀時需同步對比空白對照和質控菌株結果，僅當質控菌株結果符合預期時，試驗數(shù)據才有效。
5、培養(yǎng)基儲存與有效期
配制好的斜面需密封，置于 2–8℃ 避光冷藏，避免陽光直射導致指示劑分解褪色。
儲存期限一般不超過 1 個月，使用前需檢查是否有污染、結塊，過期培養(yǎng)基需重新質控或直接廢棄。
6、與其他培養(yǎng)基的聯(lián)用
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