需氧革蘭陽性桿菌鑒定的生化反應(yīng)與方法及操作流程！
小楊 / 2025-12-25 10:03:54
百歐博偉生物：需氧革蘭陽性桿菌的鑒定是臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)，需結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)及分子生物學(xué)方法等多方面信息，逐步縮小范圍并最終確定菌種。以下是具體的鑒定流程和關(guān)鍵方法：
一、初步篩選：形態(tài)學(xué)與培養(yǎng)特性分析
鑒定的第一步是通過顯微鏡觀察和培養(yǎng)特征獲得初步信息，為后續(xù)鑒定方向提供依據(jù)。
1、革蘭染色與形態(tài)觀察
直接涂片或純培養(yǎng)物革蘭染色：確認(rèn)細(xì)菌為革蘭陽性桿菌（排除革蘭陰性菌或革蘭陽性球菌）。
示例：若發(fā)現(xiàn)“革蘭陽性大桿菌，兩端平截，竹節(jié)狀排列，有芽孢”，可初步懷疑為炭疽芽孢桿菌。
2、培養(yǎng)特性分析
根據(jù)菌落形態(tài)（大小、顏色、邊緣、粗糙/光滑）、溶血情況（如
李斯特菌的 β 溶血、
蠟樣芽孢桿菌的 β 溶血）、特殊培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)（如
白喉棒狀桿菌在亞碲酸鉀平板上的黑色菌落、
單核細(xì)胞增生李斯特菌在 PALCAM 瓊脂上的特征菌落）進(jìn)行初步歸類。
二、生化反應(yīng)鑒定：區(qū)分不同菌屬/菌種
生化反應(yīng)是鑒別需氧革蘭陽性桿菌的核心手段，通過檢測(cè)細(xì)菌對(duì)碳水化合物、氨基酸、酶類的利用能力，明確代謝特征。不同菌屬的關(guān)鍵生化反應(yīng)如下：
1、棒狀桿菌屬（以白喉棒狀桿菌為例）
觸酶試驗(yàn)：陽性（與鏈球菌區(qū)分）。
硝酸鹽還原試驗(yàn)：陽性。
尿素酶試驗(yàn)：陰性。
糖發(fā)酵試驗(yàn)：可發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖，不發(fā)酵蔗糖（與其他棒狀桿菌鑒別）。
毒力試驗(yàn)：Elek 平板試驗(yàn)（檢測(cè)白喉毒素），陽性可確診為產(chǎn)毒白喉棒狀桿菌。
2、芽孢桿菌屬
炭疽芽孢桿菌：
觸酶陽性，動(dòng)力陰性（與其他芽孢桿菌區(qū)分，如蠟樣芽孢桿菌動(dòng)力陽性）。
不發(fā)酵甘露醇，能液化明膠，串珠試驗(yàn)陽性（在含青霉素培養(yǎng)基中呈串珠狀）。
蠟樣芽孢桿菌：
觸酶陽性，動(dòng)力陽性，能發(fā)酵甘露醇，卵磷脂酶試驗(yàn)陽性（在 MYP 培養(yǎng)基上形成粉紅色暈圈）。
3、李斯特菌屬（單核細(xì)胞增生李斯特菌）
觸酶陽性，動(dòng)力試驗(yàn)：25℃時(shí)有動(dòng)力（呈“翻筋斗”樣運(yùn)動(dòng)），37℃時(shí)動(dòng)力減弱（特征性）。
甲基紅（MR）試驗(yàn)陽性，VP 試驗(yàn)陽性。
糖發(fā)酵：發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖，不發(fā)酵甘露醇、木糖。
CAMP 試驗(yàn)陽性（與金黃色葡萄球菌協(xié)同產(chǎn)生更大溶血環(huán)）。
4、丹毒絲菌屬（紅斑丹毒絲菌）
觸酶陰性（與多數(shù)需氧革蘭陽性桿菌區(qū)分），動(dòng)力陰性。
糖發(fā)酵：發(fā)酵葡萄糖、乳糖，不發(fā)酵蔗糖。
硫化氫（H?S）試驗(yàn)陽性（在三糖鐵瓊脂中底層變黑），是重要鑒別指標(biāo)。
三、血清學(xué)與毒力試驗(yàn)：特異性鑒定
部分菌種需通過血清學(xué)或毒力試驗(yàn)確認(rèn)，尤其針對(duì)具有特殊抗原或毒素的細(xì)菌。
白喉棒狀桿菌：除 Elek 毒力試驗(yàn)外，可通過抗毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)毒素，或用熒光抗體染色檢測(cè)菌體抗原。
炭疽芽孢桿菌：可用炭疽莢膜抗原血清做莢膜腫脹試驗(yàn)，陽性可快速確診。
李斯特菌：可通過特異性抗血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，區(qū)分單核細(xì)胞增生李斯特菌與其他李斯特菌（如伊氏李斯特菌）。
四、分子生物學(xué)方法：精準(zhǔn)鑒定
對(duì)于難以通過傳統(tǒng)方法鑒別的菌株（如少見菌種或變異株），可采用分子生物學(xué)技術(shù)：
PCR 技術(shù)：擴(kuò)增特異性基因（如白喉棒狀桿菌的 tox 基因、炭疽芽孢桿菌的 pag 基因），通過測(cè)序或電泳確認(rèn)。
16S rRNA 基因測(cè)序：通過比對(duì)細(xì)菌 16S rRNA 基因序列，明確菌種分類（金標(biāo)準(zhǔn)之一）。
基因芯片/質(zhì)譜技術(shù)：如基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜，通過分析細(xì)菌蛋白質(zhì)譜快速鑒定菌種，準(zhǔn)確率高且耗時(shí)短，已廣泛應(yīng)用于臨床。
五、鑒定流程總結(jié)
初步分類：通過革蘭染色、芽孢有無、培養(yǎng)特性（如溶血、特殊培養(yǎng)基生長(zhǎng)）將細(xì)菌歸入可能的菌屬（如
芽孢桿菌屬、
棒狀桿菌屬等）。
生化篩選：通過觸酶、動(dòng)力、糖發(fā)酵等關(guān)鍵生化試驗(yàn)縮小范圍，區(qū)分同屬內(nèi)不同菌種。
特異性試驗(yàn)：結(jié)合血清學(xué)、毒力試驗(yàn)或分子生物學(xué)方法，最終確認(rèn)菌種。
需氧革蘭陽性桿菌的鑒定需綜合多種方法，傳統(tǒng)生化反應(yīng)仍是基礎(chǔ)，而分子生物學(xué)和質(zhì)譜技術(shù)則大幅提高了鑒定的快速性和準(zhǔn)確性，為臨床感染的精準(zhǔn)診療提供了重要支持。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購買等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基的使用方法與注意事項(xiàng)及結(jié)果判定！
下一篇：沙門氏菌血清學(xué)鑒定的前期準(zhǔn)備與操作過程及結(jié)果判斷！