瑞氏染色液的質(zhì)控要點與標(biāo)準(zhǔn)操作及常見問題與優(yōu)化策略！
小楊 / 2025-12-22 09:08:35
瑞氏染色液是血細(xì)胞與體液細(xì)胞涂片染色的經(jīng)典試劑，核心是酸性伊紅與堿性亞甲藍(lán)在甲醇中解離后，通過物理吸附與化學(xué)親和作用對細(xì)胞不同成分選擇性著色，甲醇同時兼具溶解染料與固定細(xì)胞的雙重功能。以下從原理、標(biāo)準(zhǔn)操作、質(zhì)控要點、常見問題及優(yōu)化策略展開，為微生物檢驗與細(xì)胞形態(tài)分析提供可直接落地的技術(shù)方案。
一、染色核心原理
染料組成與解離：瑞氏染料為酸性伊紅（E?，有色陰離子）與堿性亞甲藍(lán)（M?，有色陽離子）的復(fù)合染料，溶于甲醇后解離為帶電荷的離子態(tài)；亞甲藍(lán)久置易氧化為天青系列次級染料，增強對核染色質(zhì)的著色能力。
作用機制
化學(xué)親和：細(xì)胞堿性成分（如血紅蛋白、嗜酸性顆粒）結(jié)合伊紅呈粉紅色；酸性成分（如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒）結(jié)合亞甲藍(lán)/天青呈藍(lán)紫色；中性顆粒與兩者均結(jié)合呈淡紫紅色。
物理吸附：甲醇使蛋白沉淀為顆粒狀/網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，擴大細(xì)胞與染料的接觸面積，強化著色效果。
復(fù)合物形成：天青與伊紅形成天青 B - 伊紅復(fù)合物，是效應(yīng)的基礎(chǔ)，確保核質(zhì)與顆粒的清晰區(qū)分。
甲醇功能：溶解染料、固定細(xì)胞形態(tài)、加速染色反應(yīng)。
二、標(biāo)準(zhǔn)操作流程（以血涂片為例）
步驟 操作要點 注意事項
標(biāo)本制備 推制厚薄均勻的血涂片，自然干燥；骨髓涂片需更長干燥時間 避免涂片過厚/過薄，干燥不充分易導(dǎo)致細(xì)胞溶解
加染液固定 滴加瑞氏染液（Ⅰ 液）覆蓋涂片，室溫染色 1 - 2min 染液量以完全覆蓋涂片為準(zhǔn)，避免干涸
復(fù)染與混勻 滴加等量 pH 6.4 磷酸鹽緩沖液（Ⅱ 液），輕晃玻片混勻，靜置 3 - 5min 緩沖液 pH 異常會導(dǎo)致染色偏酸/偏堿；血涂片 3 - 5min，骨髓涂片可延長至 10 - 30min
沖洗干燥 用緩沖液或蒸餾水從玻片一端輕沖 30s，濾紙吸干或自然干燥 禁止直接傾倒染液后沖洗，避免細(xì)胞脫落
鏡檢 先低倍鏡瀏覽，再用油鏡觀察細(xì)胞形態(tài)與著色 核呈藍(lán)紫、漿呈粉紅、中性顆粒淡紫紅為理想效果
三、關(guān)鍵質(zhì)控與問題解決
1、質(zhì)控要點
pH 控制：緩沖液 pH 6.4 - 6.8，偏酸則核色淺、漿色偏紅；偏堿則核色深、漿色偏藍(lán)。
染液管理：使用棕色瓶避光保存，出現(xiàn)沉淀需過濾后使用；染液與緩沖液比例 1:1，可根據(jù)季節(jié)微調(diào)。
時間控制：固定 1 - 2min，復(fù)染時間按標(biāo)本類型調(diào)整，避免過染/欠染。
2、常見問題與對策
問題 原因 解決方法
染色過深 復(fù)染時間過長、染液濃度高 縮短復(fù)染時間，用甲醇/乙醇快速脫色后復(fù)染
染色過淺 固定不足、緩沖液偏酸、染液失效 延長固定時間，調(diào)整緩沖液 pH，更換新鮮染液
細(xì)胞模糊 涂片未干燥、沖洗力度大 充分干燥后染色，降低沖洗流速
顆粒不清 染液氧化不足、天青生成少 使用老化 3 個月以上的染液，或添加少量天青染料
四、應(yīng)用拓展與優(yōu)化建議
適用標(biāo)本：血液、骨髓、胸腹水、腦脊液等細(xì)胞涂片，以及細(xì)菌涂片（細(xì)菌呈藍(lán)色）。
改良方案：瑞氏 - 姬姆薩復(fù)合染色可同時優(yōu)化核與漿的著色，適合寄生蟲檢測。
染液配制：1g 瑞氏染料 + 600ml 甲醇 + 15ml 甘油，研磨溶解后過濾，棕色瓶避光保存 3 個月以上效果更佳。
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