噬菌體營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的工作原理與使用方法及注意事項！
小楊 / 2025-09-17 08:15:08
噬菌體營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基是用于培養(yǎng)宿主細(xì)菌（噬菌體的宿主），進而增殖噬菌體的常用液體培養(yǎng)基，其核心原理是通過提供宿主細(xì)菌生長所需的營養(yǎng)，間接為噬菌體復(fù)制提供場所和物質(zhì)基礎(chǔ)。以下是其原理及使用方法的詳細(xì)說明：
一、培養(yǎng)基原理
1、營養(yǎng)成分與作用
噬菌體本身無法獨立繁殖，必須依賴宿主細(xì)菌的代謝系統(tǒng)。因此，噬菌體營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的配方與普通營養(yǎng)肉湯一致，主要通過以下成分滿足宿主細(xì)菌的生長需求：
蛋白胨：提供碳源、氮源和維生素等，為細(xì)菌合成蛋白質(zhì)、核酸等提供原料。
牛肉膏：補充碳水化合物、礦物質(zhì)和生長因子，促進細(xì)菌快速繁殖。
氯化鈉（NaCl）：維持培養(yǎng)基的滲透壓，保證細(xì)菌細(xì)胞的正常形態(tài)和生理功能。
水：作為溶劑，維持培養(yǎng)基的液態(tài)環(huán)境，便于細(xì)菌代謝和噬菌體擴散。
2、作用機制
當(dāng)宿主細(xì)菌在培養(yǎng)基中大量繁殖（達(dá)到對數(shù)生長期）時，加入噬菌體后，噬菌體可吸附于細(xì)菌表面，侵入細(xì)菌體內(nèi)，利用細(xì)菌的核酸和蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)復(fù)制自身核酸和蛋白質(zhì)，組裝成新的噬菌體，最終裂解細(xì)菌釋放子代噬菌體，實現(xiàn)噬菌體的增殖。
二、使用方法
（一）培養(yǎng)基制備
1、配方（常用基礎(chǔ)配方，可根據(jù)宿主菌調(diào)整）
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1000mL
調(diào)節(jié) pH 至 7.2-7.4（25℃時）。
2、制備步驟
將上述成分依次加入蒸餾水中，加熱攪拌至完全溶解。
用 1mol/L HCl 或 NaOH 調(diào)節(jié) pH 至 7.2-7.4。
分裝到錐形瓶或試管中（如 50mL 培養(yǎng)基裝入 250mL 錐形瓶，便于后續(xù)搖菌），加塞滅菌。
高壓蒸汽滅菌：121℃、103.4kPa（15psi）條件下滅菌 20 分鐘，滅菌后取出冷卻至室溫，備用（可 4℃冷藏保存，有效期 1-2 周）。
（二）噬菌體增殖與培養(yǎng)操作
1、宿主菌活化
從保存的宿主菌斜面（如
大腸桿菌用于 T2 噬菌體）挑取單菌落，接種到 5-10mL 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中。
37℃（或宿主菌最適溫度）、180-200rpm 搖床培養(yǎng)過夜（約 16-24 小時），使細(xì)菌處于對數(shù)生長期（OD600≈0.5-0.8）。
2、噬菌體接種與培養(yǎng)
取適量對數(shù)期宿主菌培養(yǎng)液，按 1%-5% 的比例接種到新鮮營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中（如 100mL 培養(yǎng)基加 1-5mL 菌液），37℃搖床培養(yǎng) 1-2 小時，使細(xì)菌處于活躍生長期。
加入噬菌體原液（按感染復(fù)數(shù) MOI=0.1-1，即噬菌體顆粒數(shù)：細(xì)菌數(shù)≈1:10 至 1:1），輕輕混勻。
繼續(xù)在宿主菌最適溫度下?lián)u床培養(yǎng)（通常 37℃，150rpm），培養(yǎng)時間根據(jù)噬菌體裂解特性調(diào)整（一般 4-12 小時，觀察到培養(yǎng)液由渾濁變清亮，提示細(xì)菌被裂解，噬菌體大量增殖）。
3、噬菌體收獲（可選）
若需收集噬菌體，可將培養(yǎng)物 4℃、8000rpm 離心 10 分鐘，去除細(xì)菌碎片，上清液即為含噬菌體的粗提液，可用于后續(xù)純化或效價測定。
三、注意事項
無菌操作：全程需在無菌環(huán)境（如超凈工作臺）中進行，避免雜菌污染，否則雜菌會競爭營養(yǎng)，影響宿主菌生長和噬菌體增殖。
宿主菌適配性：不同噬菌體有特異性宿主菌，需確保所用營養(yǎng)肉湯適合該宿主菌生長（如某些苛養(yǎng)菌可能需要添加額外生長因子）。
培養(yǎng)條件優(yōu)化：溫度、搖床轉(zhuǎn)速、感染復(fù)數(shù)（MOI）等需根據(jù)具體噬菌體和宿主菌調(diào)整，以獲得最佳裂解效果。
儲存：制備好的培養(yǎng)基需滅菌后密封保存，避免反復(fù)凍融；含噬菌體的培養(yǎng)液短期可 4℃保存，長期需 - 20℃或 - 80℃冷凍保存（可加甘油至終濃度 10%-20% 防止凍融損傷）。
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