腦膜炎球菌和李斯特菌培養(yǎng)的核心要素與具體操作流程！
小楊 / 2025-09-16 09:19:05
腦膜炎球菌（Neisseria meningitidis）和
李斯特菌（Listeria monocytogenes）是兩類致病機(jī)制、生物學(xué)特性差異顯著的細(xì)菌，其培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基選擇及鑒定流程均存在明確區(qū)別，以下從培養(yǎng)核心要素、具體操作流程及關(guān)鍵注意事項(xiàng)三方面展開(kāi)詳細(xì)對(duì)比說(shuō)明：
一、核心差異：腦膜炎球菌 vs 李斯特菌培養(yǎng)關(guān)鍵要素
兩類細(xì)菌的培養(yǎng)差異源于其生物學(xué)特性（
腦膜炎球菌為需氧/微需氧革蘭氏陰性雙球菌，
李斯特菌為兼性厭氧革蘭氏陽(yáng)性桿菌，且有動(dòng)力、耐低溫），核心要素對(duì)比見(jiàn)下表：
培養(yǎng)要素 腦膜炎球菌（N. meningitidis） 李斯特菌（L. monocytogenes）
營(yíng)養(yǎng)需求 營(yíng)養(yǎng)苛刻，需富含蛋白質(zhì)、維生素、鐵離子 營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可生長(zhǎng)，但需特定培養(yǎng)基篩選
氧氣環(huán)境 需氧或微需氧（5% CO?環(huán)境最佳，促進(jìn)莢膜合成） 兼性厭氧（有氧/無(wú)氧環(huán)境均可生長(zhǎng)，有氧下生長(zhǎng)更旺盛）
溫度條件 最適溫度 35~37℃（人體體溫，低于 30℃或高于 40℃生長(zhǎng)受抑） 最適溫度 30~37℃，但耐低溫（4℃仍可緩慢生長(zhǎng)，“冷增菌”特性）
pH 范圍 中性偏堿，最適 pH 7.4~7.6 中性偏酸，最適 pH 6.0~7.0
關(guān)鍵培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：巧克力培養(yǎng)基；選擇培養(yǎng)基：改良 Thayer-Martin（TM）培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、腦心浸液瓊脂；選擇培養(yǎng)基：PALCAM 培養(yǎng)基
菌落特征 巧克力培養(yǎng)基上：圓形、光滑、濕潤(rùn)、透明 /半透明，直徑 1~2mm，邊緣整齊；TM 培養(yǎng)基上菌落類似，雜菌被抑制 BHI 瓊脂上：圓形、光滑、灰白色，直徑 0.5~1mm；PALCAM 培養(yǎng)基上：黑色中心，周圍有棕色暈圈
培養(yǎng)時(shí)間 18~24 小時(shí)（5% CO?培養(yǎng)箱），若生長(zhǎng)緩慢需延長(zhǎng)至 48 小時(shí) 普通環(huán)境 18~24 小時(shí)，冷增菌（4℃）需 7~14 天（用于低濃度樣本，如食品）
二、具體培養(yǎng)操作流程
（一）腦膜炎球菌培養(yǎng)（以臨床標(biāo)本為例，如腦脊液、血液）
1、標(biāo)本預(yù)處理
腦脊液：離心（3000rpm，10 分鐘），取沉淀接種；
血液：用含抗凝劑的血液直接接種于巧克力血瓊脂平板，或先接種肉湯增菌（如腦心浸液肉湯，37℃ 5% CO?培養(yǎng) 6~8 小時(shí)后轉(zhuǎn)種平板）。
2、培養(yǎng)基接種
取預(yù)處理后的標(biāo)本，在巧克力培養(yǎng)基或改良 TM 培養(yǎng)基上劃線（分區(qū)劃線法，保證單菌落生長(zhǎng)）。
3、培養(yǎng)環(huán)境控制
放入5% CO?培養(yǎng)箱（需同時(shí)控制濕度，避免培養(yǎng)基干燥），35~37℃培養(yǎng) 18~24 小時(shí)。
4、菌落觀察與鑒定
若出現(xiàn)“露滴狀”透明菌落，挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色；
進(jìn)一步生化鑒定：氧化酶陽(yáng)性（滴加氧化酶試劑后菌落呈紫色）、僅分解葡萄糖和麥芽糖（發(fā)酵試驗(yàn)），可排除同屬的淋病奈瑟菌（僅分解葡萄糖）。
（二）李斯特菌培養(yǎng)（以食品樣本或臨床標(biāo)本為例，如腦脊液、胎盤(pán)組織）
1、標(biāo)本預(yù)處理（分兩種場(chǎng)景）
高濃度標(biāo)本（如純培養(yǎng)物）：直接取少量標(biāo)本劃線接種；
低濃度/污染標(biāo)本（如食品、糞便）：先進(jìn)行冷增菌—— 將標(biāo)本接種于肉湯（含選擇性抗生素），4℃培養(yǎng) 7~14 天，期間每周轉(zhuǎn)種 1 次至 PALCAM 培養(yǎng)基，提高檢出率。
2、培養(yǎng)基接種
取標(biāo)本或增菌后的肉湯，在 BHI 瓊脂（基礎(chǔ)培養(yǎng)）或 PALCAM 培養(yǎng)基（選擇培養(yǎng)）上劃線，30~37℃培養(yǎng) 18~24 小時(shí)。
3、培養(yǎng)環(huán)境控制
無(wú)需 CO?，普通培養(yǎng)箱即可（兼性厭氧，有氧環(huán)境生長(zhǎng)更佳）；若需觀察動(dòng)力，可在 25℃培養(yǎng)（25℃時(shí)動(dòng)力強(qiáng)，呈“翻筋斗”樣運(yùn)動(dòng)；37℃時(shí)動(dòng)力弱）。
4、菌落觀察與鑒定
PALCAM 培養(yǎng)基上：挑取“黑色中心 + 棕色暈圈”的菌落，革蘭氏染色（鏡下為革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，單個(gè)或短鏈排列）；
生化鑒定：觸酶陽(yáng)性、發(fā)酵葡萄糖 / 麥芽糖，CAMP 試驗(yàn)陽(yáng)性（與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)時(shí)，在葡萄球菌菌落周圍形成“箭頭狀”溶血區(qū)，關(guān)鍵鑒別特征）。
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
1、腦膜炎球菌：無(wú)菌操作與安全防護(hù)
腦膜炎球菌為苛養(yǎng)菌，標(biāo)本采集后需立即送檢（避免室溫放置過(guò)久導(dǎo)致細(xì)菌死亡），接種過(guò)程需在生物安全柜中進(jìn)行（該菌可通過(guò)飛沫傳播，引起實(shí)驗(yàn)室感染）；
若初代培養(yǎng)未生長(zhǎng)，需排除培養(yǎng)基質(zhì)量（如巧克力培養(yǎng)基需新鮮制備，避免血紅蛋白氧化）或培養(yǎng)環(huán)境（CO?濃度是否達(dá)標(biāo)，需定期校準(zhǔn)培養(yǎng)箱）問(wèn)題。
李斯特菌的核心特性是耐低溫，普通細(xì)菌在 4℃會(huì)停止生長(zhǎng)，而其可緩慢繁殖，因此“冷增菌”是食品或低濃度臨床標(biāo)本（如免疫低下患者的腦脊液）的關(guān)鍵步驟，可有效排除雜菌干擾；
注意與其他革蘭氏陽(yáng)性桿菌鑒別（如棒狀桿菌）：李斯特菌在 25℃有動(dòng)力，而棒狀桿菌無(wú)動(dòng)力，可通過(guò)動(dòng)力試驗(yàn)（懸滴法或半固體培養(yǎng)基）區(qū)分。
3、質(zhì)量控制
每次培養(yǎng)需同時(shí)接種陽(yáng)性對(duì)照菌（腦膜炎球菌用標(biāo)準(zhǔn)株
ATCC 13090，李斯特菌用標(biāo)準(zhǔn)株
ATCC 19115）和陰性對(duì)照菌（如
大腸桿菌，驗(yàn)證選擇培養(yǎng)基的抑制效果），確保培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境合格。
綜上，兩類細(xì)菌的培養(yǎng)需緊扣其生物學(xué)特性 ——
腦膜炎球菌依賴“巧克力培養(yǎng)基 + CO?”，
李斯特菌依賴“冷增菌 + PALCAM 培養(yǎng)基”，同時(shí)結(jié)合生化鑒定實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)分離。
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