中國微生物菌種查詢網(wǎng)沙門菌是引起食物中毒和腸道腹瀉的病原菌之一。在食物中毒等突發(fā)公共衛(wèi)生事件中，在我國內(nèi)陸地區(qū)沙門菌占首位。因此，尋找一種快速準(zhǔn)確的鑒定沙門菌的試驗方法尤顯重要。沙門菌顯色培養(yǎng)基(CHROM AgarSalmonella, CAS)是一種新型培養(yǎng)基，由于添加了特異的顯色底物組合可以更精確的反映出樣品中含有的沙門菌。為了了解其在實際工作中的優(yōu)勢特做如下比對試驗。
一、材料和方法
1、材料
樣本來源 選擇2008年7～9月(東北腹瀉流行季節(jié))由吉林大學(xué)臨床二院、吉林市醫(yī)院腸道門診送檢的符合監(jiān)測病例標(biāo)準(zhǔn)的腹瀉病人的糞便或肛拭標(biāo)本共1000份。
培養(yǎng)基 亞硒酸鹽增菌液(SF)、沙門-志賀菌瓊脂(SS、HE)和腸道綜合雙糖管及其腸桿菌科鑒定編碼等培養(yǎng)基均購置北京陸橋生物技術(shù)公司；腸道菌生化鑒定卡API20E購置法國梅里埃公司；沙門菌顯色培養(yǎng)基CAS產(chǎn)自法國科瑪嘉，鄭州博賽生物技術(shù)研究所分裝；沙門菌診斷血清購置衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所。以上試劑均在有效期內(nèi)使用。
2、方法
標(biāo)本的檢測方法 肛拭樣品檢測按照GB／T17012-1997中相應(yīng)操作規(guī)程進行。
菌株的篩選和鑒定 在CAS和SS、HE分離平板上挑取相應(yīng)的疑似菌落接種腸道雙糖鑒別生化管，經(jīng)初篩符合者(甘露醇＋、葡萄糖＋、尿素－、蔗糖－、動力＋、電基質(zhì)-、硫化氫＋)做沙門菌檢驗地帶網(wǎng)血清玻片凝集試驗和系統(tǒng)生化鑒別試驗，如果生化符合、血清多價“O”、凝集的菌株再做單價凝集，按Kuffman white抗原表用“O”、“H”、因子血清或“H”位相誘導(dǎo)鑒定出完整抗原式，初篩排出的疑似菌株經(jīng)氧化酶試驗陰性后系統(tǒng)生化編碼鑒定到種。
菌株接種培養(yǎng) 將鑒定出的16株沙門菌和非16株沙門菌接種在CAS培養(yǎng)基和SS、HE培養(yǎng)基上，經(jīng)37℃24小時培養(yǎng)后觀察菌落顏色。
二、結(jié)果
1、菌落培養(yǎng)情況
16株沙門菌和16株非沙門菌在CAS培養(yǎng)基上的菌落顏色見表1。在CAS平板上，沙門菌落顯紫紅色、大腸桿菌、陰溝桿菌、枸櫞酸桿菌和宋內(nèi)志賀氏菌菌落顯藍色，痢疾桿菌和變形桿菌顯無色或灰白色。
2、 1000份腹瀉便CAS檢出16株沙門菌檢出率為1.6%；SS檢出15株沙門菌檢出率為1.5%；HE檢出14株沙門菌檢出率為1.4%。三種培養(yǎng)基檢出結(jié)果類似，CAS培養(yǎng)基與SS比較(x2=0.082，P＞0.05)無顯著性差異；CAS培養(yǎng)基與HE比較(x2=0.13，P＞0.05)無顯著性差異。
三、討論
在腸道門診中由于糞便采樣不規(guī)范、病人廣泛服用抗生素及培養(yǎng)基的特異性有限等因素影響，傳統(tǒng)分離方法的靈敏度有所降低。沙門菌在CSA顯色平板上菌落都表現(xiàn)為檢驗地帶網(wǎng)較易辨認的紫紅色，而其他非沙門菌呈現(xiàn)藍色或灰白色。說明該顯色培養(yǎng)基對沙門菌有較高的特異性，易于辨認兩種或兩種以上混合的病原菌，可針對性的挑選沙門菌可疑菌落，避免因檢測可疑菌菌落數(shù)量少或檢測不夠熟練而導(dǎo)致漏檢的可能性。雖然CAS平板與SS、HE平板的檢測結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，但CAS平板的沙門菌檢出率高于SS、HE平板。
本次試驗SS和HE平板對沙門菌檢測的敏感性低于CAS平板的原因主要是標(biāo)本中大量枸櫞酸桿菌和復(fù)雜的腸桿菌所表現(xiàn)出的假陽性菌落的影響。由于沙門菌在CAS培養(yǎng)基上顯示紫紅色的菌落，那么在做食品檢樣時，就可以比較容易的區(qū)分沙門菌落和食物形成的類菌落似的殘渣。
綜上所述，SS、HE平板仍是國內(nèi)實驗室普遍采用的沙門菌選擇性平板之一，CAS平板與SS、HE平板適用于沙門菌的分離。但沙門菌在CAS平板上有易于鑒別、選擇性好的特點，其優(yōu)勢還是遠遠大于普通培養(yǎng)基的選擇性。特別是在混有沙門菌的混合菌和突發(fā)公共衛(wèi)生事件的處理中，首選CAS平板還是會取得較好的分離效果。