沙門氏菌CDC K-1891的培養(yǎng)方法和檢測-ATCC菌種
菌種名稱：沙門氏菌
拉丁名：Salmonella enterica subsp.
統(tǒng)一編號：ATCC 13076
菌種別名：CDC K-1891 [ATCC 25928]
沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌。 為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的短桿菌（比大腸桿菌細(xì)），（0.7～1.5μm）×（2～5μm）散在，無莢膜和芽孢，（除雞白痢沙門氏菌、雞傷寒沙門氏菌外）都具有周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，大多數(shù)具有菌毛，能吸附于宿主細(xì)胞表面或凝集豚鼠紅細(xì)胞。
一、培養(yǎng)方法
用于沙門氏菌分析的傳統(tǒng)方法是食物樣品分步增菌，以增加病原的可檢出率，這種培養(yǎng)方法總體可分4個(gè)不同階段或步驟。
第一步（預(yù)增菌），將樣品加到一種高營養(yǎng)、無選擇性的培養(yǎng)基中，溫度37℃，使那些“致傷”的細(xì)菌復(fù)蘇及使所有微生物生長。雖然緩沖胨水被建議常規(guī)使用（由于其可保持溶液pH值穩(wěn)定），但對培養(yǎng)基的選擇仍存有爭論。
第二步，是選擇性增菌步驟，它使沙門氏菌生長而使肉湯中同時(shí)存在的微生物數(shù)量減少，與預(yù)增菌培養(yǎng)基相似，對選擇性培養(yǎng)基的選擇，也存在許多不同的觀點(diǎn)。應(yīng)用主要有如下3種類型：連四硫基鹽肉（Tetrathionatebroth)、硒酸鹽胱氨酸肉湯（Selenitecystinebroth)和RV(Rappaport-Vassiliadis)培養(yǎng)基。由于沒有任何一種培養(yǎng)基可以全面地保持所有食品基質(zhì)或各種沙門氏菌血清型，所以，較適當(dāng)?shù)淖龇ň褪鞘褂脙煞N培養(yǎng)基平行地進(jìn)行試驗(yàn)。
第三步，是分離步驟，即選擇性培養(yǎng)物在含一種或多種抑制非沙門氏菌生長制劑的瓊脂平板上劃線培養(yǎng)，然后對平板上肉眼可見的特征性菌落進(jìn)行確認(rèn)，并對該菌落分離物進(jìn)行一系列生化和血清學(xué)檢測，以作出鑒定。傳統(tǒng)沙門氏菌檢測法全過程需時(shí)至少4～7天，才能得出明確的診斷結(jié)果
二、檢測方法
增菌
輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過的樣品混合物，移取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL TTB 內(nèi)，于42 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24h。同時(shí)，另取1 mL，轉(zhuǎn)種于10 mL SC 內(nèi)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h。
前增菌
稱取25 g（mL）樣品放入盛有225 mL BPW 的無菌均質(zhì)杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均質(zhì)1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測定pH 值，用1 mol/mL 無菌NaOH 或HCl 調(diào)pH 至6.8±0.2。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500 mL 錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于36 ℃±1 ℃培養(yǎng)8 h～18h。
如為冷凍產(chǎn)品，應(yīng)在45 ℃以下不超過15 min，或2 ℃～5 ℃不超過18 h 解凍。
分離
分別用接種環(huán)取增菌液1 環(huán)，劃線接種于一個(gè)BS 瓊脂平板和一個(gè)XLD 瓊脂平板（或HE 瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于36 ℃±1 ℃分別培養(yǎng)18 h～24 h （XLD 瓊脂平板、HE 瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板） 或40 h～48 h （BS 瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長的菌落。
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