生物制品微生物控制和檢查的項(xiàng)目與方法及關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)！
小楊 / 2026-01-08 10:28:51
百歐博偉生物：生物制品的微生物控制與檢查是保障其安全性、有效性和質(zhì)量穩(wěn)定性的核心環(huán)節(jié)，覆蓋從原材料、生產(chǎn)過(guò)程到成品放行的全生命周期，核心目標(biāo)是控制微生物污染（包括細(xì)菌、真菌、病毒、支原體、熱原等），防止產(chǎn)品變質(zhì)、引發(fā)不良反應(yīng)或降低藥效。以下從核心控制維度、檢查項(xiàng)目與方法、關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)、常見(jiàn)問(wèn)題與應(yīng)對(duì)四個(gè)維度系統(tǒng)梳理：
一、核心控制維度
生物制品微生物控制分為“預(yù)防控制”（過(guò)程管控）和“終端檢查”（放行驗(yàn)證）兩大核心，二者結(jié)合實(shí)現(xiàn)全流程風(fēng)險(xiǎn)管控：
維度 核心目標(biāo) 管控范圍
預(yù)防控制 從源頭減少微生物污染 原材料、生產(chǎn)環(huán)境、人員、設(shè)備、工藝
終端檢查 驗(yàn)證成品微生物符合標(biāo)準(zhǔn) 成品、半成品、中間品
二、核心檢查項(xiàng)目與方法
生物制品微生物檢查需遵循《中國(guó)藥典》（ChP）、《歐洲藥典》（EP）、《美國(guó)藥典》（USP）等藥典標(biāo)準(zhǔn)，核心項(xiàng)目如下：
1、無(wú)菌檢查（核心放行項(xiàng)）
原理：驗(yàn)證生物制品中無(wú)活的微生物存在，是注射用、植入用生物制品的強(qiáng)制檢查項(xiàng)。
適用范圍：疫苗、血液制品、單克隆抗體、重組蛋白、細(xì)胞治療產(chǎn)品等無(wú)菌制劑。
操作步驟：
樣品前處理：根據(jù)產(chǎn)品特性（如含抑菌成分）進(jìn)行中和、稀釋或過(guò)濾（如薄膜過(guò)濾法），消除產(chǎn)品自身抑菌作用；
培養(yǎng)基接種：將處理后的樣品接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（需氧/厭氧菌）和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（真菌/需氧菌）；
培養(yǎng)觀察：30~35℃培養(yǎng) 14 天（細(xì)菌）、20~25℃培養(yǎng) 14 天（真菌），觀察是否有菌生長(zhǎng)；
結(jié)果判定：無(wú)微生物生長(zhǎng)為合格，若有菌生長(zhǎng)需進(jìn)一步鑒定（如菌落形態(tài)、生化試驗(yàn)），確認(rèn)是否為污染菌。
注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)需在 A 級(jí)潔凈區(qū)（無(wú)菌隔離系統(tǒng)）進(jìn)行，避免環(huán)境污染；
需設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（如
金黃色葡萄球菌、
白色念珠菌）和陰性對(duì)照，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)體系有效性。
2、微生物限度檢查
原理：控制非無(wú)菌生物制品中的微生物總數(shù)及致病菌數(shù)量。
檢查指標(biāo)：
總需氧菌數(shù)（TAMC）：≤10³~10? CFU/g/mL（依產(chǎn)品類別調(diào)整）；
總霉菌和酵母菌數(shù)（TYMC）：≤10²~10³ CFU/g/mL；
方法：平皿法（傾注/涂布）、薄膜過(guò)濾法，計(jì)數(shù)菌落數(shù)并進(jìn)行致病菌分離鑒定。
3、內(nèi)毒素/熱原檢查
原理：內(nèi)毒素（革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁脂多糖）是引發(fā)發(fā)熱反應(yīng)的核心物質(zhì)，需控制其含量；熱原檢查為整體動(dòng)物法，驗(yàn)證產(chǎn)品無(wú)致熱作用。
兩種方法對(duì)比：
方法 原理 適用場(chǎng)景 限值要求
鱟試劑法（LAL） 鱟變形細(xì)胞裂解物與內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng) 大多數(shù)注射用生物制品 依產(chǎn)品定（如疫苗≤10 EU/mL）
家兔法 給家兔注射樣品后監(jiān)測(cè)體溫變化 鱟試劑法不適用的產(chǎn)品（如含干擾成分） 體溫升高≤0.6℃，無(wú)集體升溫
注意事項(xiàng)：
鱟試劑法需做干擾試驗(yàn)，確認(rèn)產(chǎn)品不影響凝集反應(yīng)；
實(shí)驗(yàn)用水、耗材需無(wú)內(nèi)毒素（內(nèi)毒素≤0.015 EU/mL）。
4、特定微生物檢查
針對(duì)生物制品生產(chǎn)過(guò)程中高風(fēng)險(xiǎn)污染菌的專項(xiàng)檢查，常見(jiàn)類型：
支原體檢查：細(xì)胞治療產(chǎn)品、重組蛋白（用細(xì)胞表達(dá)體系）的必查項(xiàng)，方法包括培養(yǎng)法、PCR 法、熒光染色法；
病毒檢查：疫苗、血液制品需檢查外源病毒，方法包括細(xì)胞培養(yǎng)法、核酸檢測(cè)（qPCR）、血清學(xué)方法；
真菌檢查：針對(duì)易受真菌污染的產(chǎn)品（如含糖培養(yǎng)基制備的生物制品），重點(diǎn)檢查念珠菌、曲霉等。
5、抑菌/殺菌效力檢查
原理：驗(yàn)證含防腐劑的生物制品的防腐劑有效性，確保有效期內(nèi)抑制微生物生長(zhǎng)。
方法：挑戰(zhàn)試驗(yàn) —— 向產(chǎn)品中加入規(guī)定濃度的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)菌（如
金黃色葡萄球菌、
大腸埃希菌、
白色念珠菌），定期取樣計(jì)數(shù)，判斷菌數(shù)下降幅度是否符合標(biāo)準(zhǔn)（如 7 天內(nèi)菌數(shù)下降≥3 lg）。
三、關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)（預(yù)防控制）
微生物檢查的核心是“防大于檢”，生產(chǎn)全流程的預(yù)防控制可顯著降低污染風(fēng)險(xiǎn)：
1、原材料控制：
原輔材料（如培養(yǎng)基、血清、蛋白酶）需符合微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，供應(yīng)商需提供檢驗(yàn)報(bào)告；
動(dòng)物源原材料（如血漿、組織）需額外檢查特定病原體。
2、生產(chǎn)環(huán)境控制：
潔凈區(qū)分級(jí)：生物制品生產(chǎn)需符合 GMP 要求，核心區(qū)域（如灌封、無(wú)菌分裝）為 A 級(jí)，周邊為 B 級(jí)，背景為 C/D 級(jí)；
環(huán)境監(jiān)測(cè)：定期監(jiān)測(cè)潔凈區(qū)的沉降菌、浮游菌、表面微生物、粒子數(shù)，確保符合標(biāo)準(zhǔn)。
3、人員與設(shè)備控制：
人員：需經(jīng)無(wú)菌操作培訓(xùn)，穿戴無(wú)菌防護(hù)服，定期進(jìn)行健康檢查；
設(shè)備：生產(chǎn)設(shè)備、管路需定期清潔、滅菌（如蒸汽滅菌、干熱滅菌、過(guò)氧化氫熏蒸），驗(yàn)證滅菌效果（生物指示劑如嗜熱脂肪芽孢桿菌）。
4、工藝控制：
無(wú)菌工藝驗(yàn)證：如除菌過(guò)濾（0.22μm 濾膜）需驗(yàn)證濾膜完整性（泡點(diǎn)試驗(yàn)）；
終滅菌產(chǎn)品：需驗(yàn)證滅菌工藝的有效性（F0 值≥12），確保殺滅所有微生物。
四、常見(jiàn)問(wèn)題與應(yīng)對(duì)
1、無(wú)菌檢查陽(yáng)性：
原因：生產(chǎn)過(guò)程污染、樣品處理不當(dāng)、環(huán)境污染；
應(yīng)對(duì)：立即隔離批次，排查污染源（如環(huán)境監(jiān)測(cè)、設(shè)備滅菌記錄、人員操作），重新取樣復(fù)檢，若仍陽(yáng)性則判為不合格。
2、內(nèi)毒素檢查干擾：
原因：產(chǎn)品含陽(yáng)離子、陰離子或蛋白質(zhì)，影響鱟試劑凝集；
應(yīng)對(duì)：采用稀釋法、中和法或添加干擾抑制劑，重新驗(yàn)證方法有效性。
3、支原體污染（細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)品）：
原因：細(xì)胞株攜帶、血清污染、操作過(guò)程污染；
應(yīng)對(duì)：使用無(wú)支原體血清，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程定期監(jiān)測(cè)，污染后可采用抗生素處理或丟棄污染細(xì)胞株。
五、合規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)
生物制品微生物控制需嚴(yán)格遵循：
《中華人民共和國(guó)藥品管理法》《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）》；
《中國(guó)藥典》四部（通則 1101 無(wú)菌檢查法、1105 微生物限度檢查法、1143 內(nèi)毒素檢查法）；
ICH Q5A（病毒安全性評(píng)價(jià)）、ICH Q8/Q9/Q10（質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理）。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對(duì)微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究。對(duì)我國(guó)生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對(duì)社會(huì)乃至國(guó)外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。
除此之外，我們還擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇耍本┌贇W博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：人體免疫系統(tǒng)的神奇能力：且看記憶細(xì)胞是如何工作的？
下一篇：高壓蒸汽滅菌溫度和時(shí)間的具體控制原則與常見(jiàn)參數(shù)！