微生物細(xì)胞大小的測定和顯微鏡直接計數(shù)法的核心差異！
小楊 / 2025-09-29 09:50:03
百歐博偉生物：微生物細(xì)胞大小測定常用顯微測微尺法，顯微鏡直接計數(shù)則多采用血細(xì)胞計數(shù)板法，兩者均需結(jié)合光學(xué)顯微鏡操作。
一、微生物細(xì)胞大小的測定（以顯微測微尺法為例）
該方法核心是通過目鏡測微尺與鏡臺測微尺的校準(zhǔn)，將目鏡刻度轉(zhuǎn)化為實(shí)際長度，再測量細(xì)胞。
1、核心工具
鏡臺測微尺：標(biāo)準(zhǔn)刻度尺，總長 1mm，分為 100 小格，每小格實(shí)際長度為 10μm，用于校準(zhǔn)。
目鏡測微尺：可放入目鏡的圓形玻片，刻有 50 或 100 小格，無實(shí)際長度，需校準(zhǔn)后使用。
2、操作步驟
安裝測微尺：將目鏡測微尺放入目鏡，鏡臺測微尺放在顯微鏡載物臺中央。
校準(zhǔn)刻度：先用低倍鏡找到鏡臺測微尺刻度，再換高倍鏡或油鏡，使兩測微尺刻度對齊，記錄重合刻度的格數(shù)，計算目鏡測微尺每小格實(shí)際長度（公式：目鏡每小格長度 = 鏡臺測微尺重合格數(shù) ×10μm÷ 目鏡測微尺重合格數(shù)）。
測量細(xì)胞：移走鏡臺測微尺，放置微生物樣品，用目鏡測微尺測量細(xì)胞的長、寬，記錄格數(shù)，結(jié)合校準(zhǔn)后的數(shù)值計算實(shí)際大小。
3、注意事項
不同放大倍數(shù)需單獨(dú)校準(zhǔn)，放大倍數(shù)越高，目鏡測微尺每小格實(shí)際長度越小。
測量時需選取 10-20 個細(xì)胞取平均值，減少誤差。
二、顯微鏡直接計數(shù)（以血細(xì)胞計數(shù)板法為例）
1、核心工具：血細(xì)胞計數(shù)板
計數(shù)板為特制載玻片，有兩個計數(shù)室，每個計數(shù)室容積為 0.1mm³（即 10??mL），常見規(guī)格為 25×16 型（25 個中格，每中格 16 個小格）或 16×25 型（16 個中格，每中格 25 個小格）。
2、操作步驟
樣品制備：將微生物培養(yǎng)液稀釋至合適濃度（一般每小格含 1-2 個細(xì)胞，避免重疊）。
加樣：取干凈計數(shù)板，蓋上蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的樣品，從蓋玻片邊緣滴加，讓樣品自行滲入計數(shù)室，靜置 5-10 分鐘。
計數(shù)：用高倍鏡觀察，計數(shù)計數(shù)室中 4 個角和中央共 5 個中格的細(xì)胞數(shù)（25×16 型），或 4 個角的 4 個中格細(xì)胞數(shù)（16×25 型），注意邊緣細(xì)胞只計“計上不計下、計左不計右”。
計算數(shù)量：公式為“每 mL 菌液細(xì)胞數(shù) = 5 個中格總細(xì)胞數(shù) ×5（或 4）× 稀釋倍數(shù) ×10?”（×10?是將 0.1mm³ 換算為 1mL）。
3、注意事項
樣品需充分搖勻，避免細(xì)胞沉淀導(dǎo)致計數(shù)偏差。
若細(xì)胞重疊或數(shù)量過多 / 過少，需重新調(diào)整稀釋倍數(shù)。
該方法計數(shù)的是活菌和死菌總數(shù)，無法區(qū)分死活細(xì)胞。
三、兩種方法的核心差異
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