食品中噬菌體污染的檢測方法之分子生物學方法與免疫學方法！
小楊 / 2025-09-05 10:48:10
百歐博偉生物：食品中
噬菌體污染的檢測是保障食品安全（尤其是發(fā)酵食品工業(yè)）的重要環(huán)節(jié)，檢測方法需結合噬菌體的特性（如依賴宿主菌增殖、可形成噬菌斑等）設計，主要包括傳統(tǒng)培養(yǎng)法、分子生物學方法及快速檢測技術等。以下是具體檢測方法的分類及應用：
一、傳統(tǒng)培養(yǎng)法（基于噬菌體的增殖與噬菌斑特性）
傳統(tǒng)方法利用
噬菌體需依賴宿主菌繁殖的特點，通過培養(yǎng)觀察噬菌體的增殖跡象（如噬菌斑、培養(yǎng)液濁度變化），是最經(jīng)典且常用的檢測手段。
1、噬菌斑檢測法（平板法）
原理：噬菌體侵染宿主菌后，在固體培養(yǎng)基上會形成肉眼可見的透明斑（噬菌斑），每個噬菌斑可認為是由一個噬菌體增殖形成，可通過計數(shù)評估噬菌體數(shù)量。
步驟：
樣品前處理：將食品樣品（如牛奶、肉類勻漿、發(fā)酵液）離心或過濾去除雜質，取上清液作為待檢樣品。
宿主菌與樣品混合：將待檢樣品與對數(shù)生長期的敏感宿主菌（如
乳酸菌、
大腸桿菌等，根據(jù)目標噬菌體選擇）混合，加入融化的半固體培養(yǎng)基（如 0.7% 瓊脂）。
平板涂布：將混合液均勻涂布在固體培養(yǎng)基（如 1.5% 瓊脂）平板上，靜置凝固后 37℃培養(yǎng) 12-24 小時。
結果觀察：若存在噬菌體，平板上會出現(xiàn)圓形、邊緣清晰的透明噬菌斑，通過計數(shù)噬菌斑數(shù)量（PFU/mL）計算樣品中噬菌體濃度。
應用：適用于檢測食品中大多數(shù)噬菌體（如
乳酸菌噬菌體、
大腸桿菌噬菌體），是發(fā)酵食品（酸奶、奶酪、醬油）中噬菌體污染檢測的常規(guī)方法。
2、液體培養(yǎng)法（濁度法）
原理：噬菌體侵染宿主菌后，會裂解細菌，導致液體培養(yǎng)基由渾濁（細菌生長）變清亮，通過觀察濁度變化判斷是否存在噬菌體。
步驟：
向含宿主菌的液體培養(yǎng)基（如營養(yǎng)肉湯）中加入待檢食品樣品，37℃振蕩培養(yǎng)。
定期觀察培養(yǎng)液濁度（肉眼或分光光度計檢測 OD 值），若由渾濁變?yōu)榍辶?，提示存在噬菌體；若持續(xù)渾濁，可能無噬菌體或噬菌體濃度極低。
優(yōu)勢：操作簡單、快速，適合初步篩查；缺點是無法定量，需結合平板法確認。
二、分子生物學方法（基于噬菌體核酸的特異性檢測）
針對
噬菌體的核酸（DNA 或 RNA）設計特異性引物或探針，通過擴增或雜交技術檢測噬菌體，具有靈敏度高、特異性強的特點，適用于快速鑒定噬菌體類型或溯源。
1、PCR 及實時熒光 PCR 法
原理：根據(jù)目標噬菌體的保守基因序列（如衣殼蛋白基因、裂解酶基因）設計引物，通過 PCR 擴增噬菌體核酸，若擴增出目標條帶，證明存在該噬菌體。
優(yōu)勢：
靈敏度極高，可檢測到微量噬菌體（pg 級核酸）；
特異性強，可區(qū)分不同血清型或基因型的噬菌體；
實時熒光 PCR 還可實現(xiàn)定量檢測。
2、核酸雜交技術
原理：用標記（熒光、生物素等）的噬菌體特異性核酸探針與樣品中噬菌體核酸雜交，通過信號強度判斷是否存在目標噬菌體。
適用場景：對已知序列的噬菌體進行定性檢測，或用于復雜樣品中噬菌體的篩選。
三、免疫學方法（基于噬菌體蛋白的檢測）
利用
噬菌體的結構蛋白（如衣殼蛋白）作為抗原，制備特異性抗體，通過抗原 - 抗體反應檢測噬菌體，適用于快速定性或半定量檢測。
常用方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫層析試紙條等。
原理：將抗體包被在固相載體上，若樣品中存在目標噬菌體，其蛋白會與抗體結合，通過酶促反應或顯色反應顯示結果。
優(yōu)勢：操作簡便、耗時短（1-2 小時），適合現(xiàn)場快速檢測；缺點是抗體制備成本高，可能存在交叉反應。
四、其他輔助技術
1、電鏡觀察法
直接觀察噬菌體的形態(tài)（如頭部、尾部結構），用于噬菌體的分離鑒定和分類，但操作復雜、成本高，僅作為確認手段。
2、流式細胞術
通過熒光標記噬菌體或宿主菌，利用流式細胞儀快速計數(shù)被噬菌體侵染的細菌，間接反映噬菌體數(shù)量，適用于大批量樣品的高通量檢測。
五、總結
食品中
噬菌體污染的檢測方法各有側重，傳統(tǒng)培養(yǎng)法（噬菌斑法）是金標準，適合定量和分離純化；分子生物學方法（PCR）靈敏度最高，適合快速鑒定和溯源；免疫學方法適合現(xiàn)場快速篩查。實際應用中常結合多種方法（如先通過液體培養(yǎng)法富集，再用 PCR 或噬菌斑法確認），以提高檢測效率和準確性。
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