酵母RNA提取試劑盒的特點與使用及注意事項有哪些？
小楊 / 2024-06-15 09:22:35
一、概述
本試劑盒適用于酵母RNA的提取，酵母細胞經(jīng)溶壁酶處理去除細胞壁后,獨特的裂解液/β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶，然后用乙醇調節(jié)結合條件后,RNA選擇性吸附于離心柱內硅基質膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物，蛋白等雜質去除，最后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。
二、產(chǎn)品特點
1、離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。
2、不需要使用有毒的苯酚,氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
3、快速，簡捷，單個樣品操作一般可在20分鐘內完成。
4、多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達1.9～2.0，基本無DNA殘留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各種實驗。
三、注意事項
1、次使用前請先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入。
2、所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13000rpm 的傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。
3、需要自備乙醇，β-巰基乙醇，水浴鍋。
4、裂解液RLT 和去蛋白液RW1 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5、關于DNA 的微量殘留：
一般情況下，一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留,本試劑盒由于采取了本公司獨特的緩沖體系和選擇了特殊吸附能力的吸附膜，在大多數(shù)RT-PCR 擴增過程中極其微量的DNA 殘留（一般電泳EB 染色紫外燈下觀察不可見）影響不是很大, 如果要進行嚴格的mRNA 表達量分析如熒光定量PCR,我們建議在進行模板和引物的選擇時：
1)選用跨內含子的引物,以穿過mRNA 中的連接區(qū),這樣DNA 就不能作為模板參與擴增反應。
2)選擇基因組DNA 和cDNA 上擴增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
3)將RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I 處理后的RNA 清潔(cleanup)。
4)在步驟去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上進行DNase I 處理。
6、RNA 純度及濃度檢測：
完整性：RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15 分鐘)檢測完整性。由于細胞中70%-80%的RNA 為rRNA，電泳后UV下應能看到非常明顯的rRNA 條帶。動物rRNA 大小分別約為5 kb 和2kb，分別相當于28S 和18S rRNA。動物RNA 樣品中rRNA 亮度應為次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否則表示RNA 樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴重降解。
純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質污染程度的指標。高質量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA 不純。
濃度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free 水將分光光度計調零，取稀釋液進行OD260, OD280 測定，按照以下公式進行RNA濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關系！
下載附件
上一篇：微生物培養(yǎng)過程中多種污染因素分析及預防方法！
下一篇：菌落總數(shù)檢測為什么平板計數(shù)瓊脂需要調節(jié)pH？