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低溫誘導霉菌分生孢子同步生長實驗!
小楊 / 2019-10-10 09:09:34


一、原理
  
使培養(yǎng)液中微生物的生理狀態(tài)比較一致,生長發(fā)育處在同一階段的培養(yǎng)方法稱同步培養(yǎng)法。同步培養(yǎng)的方法很多,最常用的有選擇法和誘導法兩種。

(一)選擇法
  
選擇法是通過過濾、密度梯度離心、膜吸附和直接選擇等方法,從細胞群體中選擇處于同一生長發(fā)育階段的細胞來進行培養(yǎng)的方法。 

⒈離心沉降分離法  處于不同生長階段的細胞,其個體大小不同,通過離心就可在一定程度分開,然后用同樣大小的細胞進行培養(yǎng)便可獲得同步培養(yǎng)。

⒉過濾分離法  用孔徑不同的微孔濾膜可將大小不同的細胞分開,剛分裂的幼齡菌體較小,能通過濾孔,其余菌體留在濾膜上面,將濾液中的幼齡細胞進行培養(yǎng),就可得到同步培養(yǎng)物。

⒊硝酸纖維素薄膜法  先將菌液通過硝酸纖維素薄膜,由于細菌與濾膜帶有不同電荷,所以細菌能吸附于膜上,翻轉薄膜,再用新鮮培養(yǎng)液濾過培養(yǎng),附著于膜上的細菌分離后的子細胞由于不與薄膜直接接觸,及菌體本身的重量,加之附著著培養(yǎng)物液的重量,便下落到收集器內,短時間內用收集內的細菌接種培養(yǎng),便可得到同步培養(yǎng)物。

選擇法同步培養(yǎng)是在不影響曲體代謝下獲得的,因而菌體的生命活動較為正常,但也有其缺點,一些微生物即使個體大小相同時,其發(fā)育階段也可能不完全一致,這樣的微生物不宜采用這種方法。

(二)誘導法
  
誘導法主要是通過控制環(huán)境條件如溫度、營養(yǎng)物質等來誘導同步生長。

1.溫度調整法  將微生物的培養(yǎng)溫度控制在亞適溫度一段時間,使其緩慢地進行代謝,但又不進行分裂。然后將培養(yǎng)溫度提高到最適生長溫度,大多數(shù)細胞就會同步分裂。

2.營養(yǎng)條件調整法  控制營養(yǎng)物的濃度或組成以達到同步生長。限制碳源或其他營養(yǎng)物,使細胞只能進行一次分裂而不能繼續(xù)生長,從而獲得剛分裂的細胞群體,然后再轉入適宜的培養(yǎng)基屮.它們便進入同步生長。
  
誘導法除上述兩種外還有其他方法,誘導法的缺點是會給細胞的正常代謝帶來一些不利影響。
  
二、材料

黑曲霉斜面菌種.麥芽汁平板4個

三、方法與步驟

1.孢子懸液的制備  取數(shù)環(huán)孢子放入盛有50ml無菌水的三角瓶中(瓶內放玻璃珠若干)充分振蕩,制成孢子懸液,孢子量約105個/ml。

2.用鑷子取圓形無菌玻璃紙1張(與培養(yǎng)皿直徑大小相似),放在麥芽汁平板上。

3.取孢子懸液0.1ml放在上述平板上,用玻璃涂布器涂布均勻,置于冰箱(4℃)2h然后取出,放入30℃溫箱培養(yǎng)1h。同時設一對照,不經低溫處理直接放入30℃溫箱培養(yǎng)11h。

4.鏡檢  計算孢廠出芽率,并比較菌絲生長情況。

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