霍亂弧菌的特征及檢測(cè)方法！
小楊 / 2019-10-10 09:22:40
霍亂弧菌(Vibrio cholerae)是革蘭氏陰性菌，菌體短小呈逗點(diǎn)狀，有單鞭毛、菌毛，部分有莢膜。共分為139個(gè)血清群，其中O1群和O139群可引起霍亂 。
霍亂弧菌是人類(lèi)霍亂的病原體,霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐，腹瀉，失水，死亡率甚高。屬于國(guó)際檢疫傳染病。
一、霍亂弧菌的特征
霍亂弧菌所致的霍亂，為烈性腸道傳染病，曾在世界上發(fā)生過(guò)幾次大流行，至今仍未平息，因此，霍亂被列為國(guó)境檢疫的傳染病。
霍亂弧菌有兩個(gè)生物型，一為古典生物型，一為愛(ài)爾托生物型，這兩個(gè)生物型在形態(tài)及血清學(xué)性狀方面幾乎相同，可作第四組霍亂噬菌體裂解試驗(yàn)，多粘菌素B敏感試驗(yàn)，雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，V-P(服-潑)二氏試驗(yàn)等試驗(yàn)加以鑒別：
本菌是需氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好?；魜y弧菌具有耐堿性，故常用堿性(pH值8.4～9.2)培養(yǎng)基選擇性分離培養(yǎng)本菌。在堿性瓊脂平板上生長(zhǎng)后，呈水滴樣光滑型菌落，而在堿性蛋白胨液體培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)6～8小時(shí)即可形成菌膜，利用這一特點(diǎn)，可以作快速增菌，進(jìn)行鑒定。在慶大霉素瓊脂平板上，生長(zhǎng)快，8～10小時(shí)能生長(zhǎng)出小菌落，可供鑒定用。霍亂弧菌能分解蔗糖、甘露醇，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能分解阿拉伯膠糖。
霍亂弧菌在未經(jīng)處理的糞便中，可存活數(shù)天；在冰箱內(nèi)的牛奶、鮮肉和魚(yú)蝦水產(chǎn)品中存活時(shí)間分別為2～4周、1周和1～3周；在室溫下存放的新鮮蔬菜中，可存活1～5天；在砧板和布上可存活相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間；在玻璃、瓷器、塑料和金屬上存活時(shí)間不超過(guò)2天?；魜y弧菌古典生物型在外界環(huán)境中生存能力不強(qiáng)，而愛(ài)爾托生物型抵抗力較強(qiáng)，在河水、井水、池塘水和海水中可存活1～3周，甚至更長(zhǎng)，有時(shí)在局部自然水中也能越冬。愛(ài)爾托生物型弧菌可粘附于海洋甲殼類(lèi)生物表面，分泌甲殼酶，分解甲殼作為營(yíng)養(yǎng)而長(zhǎng)期存活，如愛(ài)爾托生物型弧菌被人工飼養(yǎng)的泥鰍、鱔魚(yú)吞食后，可在其體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，然后排入水中。
霍亂弧菌對(duì)熱、干燥、日光及一般消毒劑均很敏感，經(jīng)干燥2小時(shí)或加熱55℃10分鐘即可死亡，煮沸立即死亡；對(duì)酸敏感，在正常胃酸中僅能存活4分鐘，接觸1∶5000～1∶10000鹽酸或硫酸、1∶2000～1∶3000升汞或1∶500000高錳酸鉀，數(shù)分鐘即被殺滅，在0.1%漂白粉中10分鐘內(nèi)即可死亡。氯化鈉的濃度高于4%或蔗糖濃度在5%以上的食物、香料、醋及酒等，均不利于霍亂弧菌的生存。
二、霍亂弧菌的檢測(cè)方法
⒈生化鑒定
能發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖、半乳糖等產(chǎn)酸產(chǎn)氣，遲緩發(fā)酵乳糖。不分解阿拉伯糖、水楊素、衛(wèi)矛醇、鼠李糖、木糖、側(cè)金盞花醇和肌醇。氧化酶、明膠液化試驗(yàn)陽(yáng)性。V-P試驗(yàn)大多數(shù)EL-Tor生物型陽(yáng)性，而古典生物型大多為陰性?；魜y弧菌能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，同時(shí)能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。因此當(dāng)霍亂弧菌培養(yǎng)在含硝酸鹽的蛋白胨水中，所產(chǎn)生的亞硝酸鹽與吲哚結(jié)合成亞硝基吲哚，滴加濃硫酸即出現(xiàn)薔薇色，稱為霍亂紅試驗(yàn)陽(yáng)性。
⒉血清凝集法
根據(jù)弧菌O抗原不同，分成Ⅵ個(gè)血清群，第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個(gè)生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個(gè)血清型：含AC者為原型（又稱稻葉型），含AB者為異型（又稱小川型），A、B、C均有者稱中間型（彥島型）。
1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個(gè)引起霍亂流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂完全相同，但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集，抗01群的抗血清對(duì)0139菌株無(wú)保護(hù)性免疫。在水中的存活時(shí)間較01群霍亂弧菌長(zhǎng)，因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株，推薦使用天津生物芯片生產(chǎn)的霍亂弧菌診斷血清。
⒊聚合酶鏈反應(yīng)法
⑴普通聚合酶鏈反應(yīng)法
核酸擴(kuò)增技術(shù)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對(duì)應(yīng)于待測(cè)病原微生物某一段特異性序列的兩端，然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過(guò)程反復(fù)擴(kuò)增，使靶序列放大上萬(wàn)倍甚至上百萬(wàn)倍而被檢測(cè)出來(lái)。一般選擇霍亂腸毒素(cholera enterotoxin，CT)基因ctx的保守序列作為靶基因。一些非產(chǎn)毒株(如環(huán)境來(lái)源的菌株)有可能通過(guò)基因水平轉(zhuǎn)移獲得毒力基因成為產(chǎn)毒株，若僅檢測(cè)ctx基因容易造成漏檢。因此，霍亂弧菌的其他重要基因，如毒力協(xié)同調(diào)節(jié)菌毛A基因(tcp A)、o抗原基因(rfb)、外膜蛋白基因(omp)以及毒力表達(dá)調(diào)控基因(toxR)等也被選用為PcR的靶基因，這大大提高了檢測(cè)的特異度。
⑵多重PCR法
與常規(guī)PCR相比，多重PCR一次反應(yīng)可檢測(cè)多個(gè)基因，節(jié)省了時(shí)間和成本。國(guó)內(nèi)、外許多學(xué)者選用霍亂弧菌的毒素基因ctx、tcp與其他基因如ompW、rfb、hly進(jìn)行組合，作為共同的靶基因，克服了由于毒力基因特異度不夠高而造成的假陽(yáng)性。多重PcR同時(shí)可準(zhǔn)確區(qū)分不同血清型的霍亂弧菌和快速鑒定其是否為產(chǎn)毒株，可謂一舉多得，大大提高了檢測(cè)效率。
⑶熒光定量PCR法
熒光定量PCR自動(dòng)化程度高、特異性強(qiáng)、無(wú)交叉污染，在霍亂弧菌的快速診斷中得到廣泛應(yīng)用。尤其是近年來(lái)，隨著引物與探針的設(shè)計(jì)更精確、多通道熒光PCR儀的開(kāi)發(fā)與廣泛使用，多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)日臻成熟，并以其高通量、低成本、高效率等優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于病毒、細(xì)菌、真菌等多種病原體的快速檢測(cè)，成為應(yīng)用的熱點(diǎn).
⒋基因芯片
與PCR方法相比，基因芯片技術(shù)能同時(shí)獲得更多病原學(xué)、生物學(xué)方面的信息，從而更為全面地分析、掌握病原微生物的特征。Vora等運(yùn)用基因芯片技術(shù)對(duì)多種致病性弧菌的毒力、毒素、耐藥基因及潛在的毒力基因進(jìn)行全面分析，對(duì)掌握這些細(xì)菌的致病性及進(jìn)行有效預(yù)防、控制等具有重要意義。但基因芯片成本較高，距離推廣應(yīng)用尚需時(shí)間等待。
為了更好的服務(wù)社會(huì)，創(chuàng)造雙方利益最大化，我們特設(shè)了中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)（family998.com）！專業(yè)為各企事業(yè)單位，科研院所，各級(jí)學(xué)校提供微生物菌種產(chǎn)品查詢、購(gòu)買(mǎi)服務(wù)！網(wǎng)站主要提供的產(chǎn)品：質(zhì)控菌種，標(biāo)準(zhǔn)菌種，中國(guó)微生物菌種4萬(wàn)多株，細(xì)胞系/株1萬(wàn)多株其中金黃色葡萄球菌，大腸埃希氏菌（大腸桿菌），沙門(mén)氏菌，黑曲霉，銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌，鏈球菌，白色念珠菌，志賀氏菌等為常用菌株。