病原性球菌形態(tài)與培養(yǎng)物觀察及致病性葡萄球菌的鑒定
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-04-04 10:04:00
病原性球菌主要指葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、腦膜炎球菌及淋球菌。
這些細(xì)菌經(jīng)常引起人類的化膿性疾病，故又稱化膿性球菌。
在臨床進(jìn)行微生物學(xué)檢查時，根據(jù)這些細(xì)菌各不相同的形態(tài)、染色、培養(yǎng)等特點(diǎn)，即可做出初步診斷。
當(dāng)難以確定它們的致病性或耐藥性時，則需作進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來鑒定。
一、病原性球菌的形態(tài)觀察
【材料】葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎球菌、淋球菌的革蘭染色片及肺炎鏈球菌的莢膜染色片。
【方法】
鏡檢上述各示教片，注意各菌的形態(tài)、排列、染色性以及肺炎球菌的莢膜。
二、病原性球菌的培養(yǎng)物觀察
【材料】金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌，甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血瓊脂平板及腦膜炎球菌在巧克力色血瓊脂平板上的24小時培養(yǎng)物。
【方法】
1、觀察金黃色、表皮和腐生葡萄球菌在血平板上的生長情況，注意菌落的色素及溶血性。
2、觀察甲、乙型溶血性鏈球菌、丙型鏈球菌、肺炎鏈球菌在血平板上的生長情況，注意菌落大小、表面、透明度及溶血性。比較甲鏈和肺炎鏈球菌的菌落有無區(qū)別。
3、觀察腦膜炎球菌在巧克力色血平板上的生長情況，注意菌落表面、透明度。
三、致病性葡萄球菌的鑒定
絕大多數(shù)致病性葡萄球菌具有如下特點(diǎn):
1、產(chǎn)生金黃色色素。
2、對家兔或綿羊紅細(xì)胞有溶血作用。
3、厭氧條件下分解甘露醇產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。
4、血漿凝固酶試驗(yàn)陽性。
（一）血漿凝固酶試驗(yàn)（試管法）
血漿凝固酶是致病性葡萄球菌產(chǎn)生的，可使含有肝素或枸椽酸鈉抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)，是判斷葡萄球菌致病性的最重要指標(biāo)。游離凝固酶用試管法檢測，結(jié)合凝固酶用玻片法測試。
【材料】金黃色及檸檬色葡萄球菌24小時肉湯培養(yǎng)物、無菌肉湯、兔血漿（1:2）、生理鹽水、試管、吸管等。
【方法】
1、于三支小試管中各加1:2兔血漿0.5ml。
2、三管分別加金黃色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌和無菌肉湯各0.5ml。
3、將試管置37℃溫箱，每半小時觀察一次（觀察時將試管稍微傾斜）。于3小時內(nèi)出現(xiàn)凝固者為陽性，一般均于1小時左右凝固。
【結(jié)果】
凡血漿呈現(xiàn)膠凍狀為陽性，仍呈液狀為陰性。
（二）血漿凝固酶試驗(yàn)（玻片法）
【材料】葡萄球菌24小時培養(yǎng)物、兔血漿、生理鹽水、玻片等。
【方法】
1、取清潔玻片一張用蠟筆劃分成二格，各加生理鹽水2接種環(huán)。
2、用接種環(huán)分別取葡萄球菌菌落少許在鹽水中磨勻，使成濃厚而均勻的細(xì)菌懸液。
3、于其中一格加兔血漿1接種環(huán)，另一格加生理鹽水1接種環(huán)。
4、1-2分鐘后觀察結(jié)果，如血漿凝固呈顆粒狀，而鹽水側(cè)仍呈均勻混濁者，表示結(jié)果陽性，如二格都無凝固現(xiàn)象出現(xiàn)者為陰性。
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