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1907年，捷克學者Halberstaeder和Prowazek發(fā)現(xiàn)沙眼包涵體，1956年我國學者湯飛凡等分離沙眼衣原體成功，引起了全世界對其進行廣泛深入的研究。沙眼衣原體(chlamydia trachomatis, Ct)與人類疾病關系密切，且目前已成為許多國家和地區(qū)常見的性傳播疾病病原體，日益引起人們重視。Ct感染的診斷決定于病原學檢查。隨著檢測技術(shù)的進展，Ct感染的診斷也不斷地發(fā)生變化。我們就此領域的研究進展作一簡述。
一、細胞生物學檢測方法
1.涂片鏡檢：Ct寄生于柱狀上皮細胞內(nèi)形成包涵體，取宮頸或尿道標本涂片后，通過碘染色或姬姆薩染色等可見細胞內(nèi)包涵體。但由于泌尿生殖道中完整細胞較少，以及細胞內(nèi)包涵體脆性較大，從而造成敏感性過低，不推薦用于臨床標本的檢查，僅限于Ct的鑒定。
2.細胞分離培養(yǎng)法：由于Ct的專性細胞寄生性，一般培養(yǎng)法不能使其生長，只有在活的細胞內(nèi)才能增殖、復制。組織細胞培養(yǎng)法分離Ct多采用McCoy細胞或 Hela-229細胞（國內(nèi)也有報道采用Hep-2細胞），染色后在顯微鏡下觀察細胞內(nèi)有無包涵體。早期曾試圖用尿標本做培養(yǎng)，但陽性率甚低，只能采用尿道或?qū)m頸拭子。培養(yǎng)法的特異性為100%，但敏感性一般低于100%，且各個實驗室操作步驟有所不同，沒有標準化，這可能有助于解釋對同一種非培養(yǎng)方法的不同評價。組織細胞培養(yǎng)法是診斷Ct感染的“金標準”，但是由于分離培養(yǎng)操作復雜，技術(shù)及設備要求高，所需時間長，且敏感性受標本采集、運送、保存等的影響較大加上國內(nèi)很多醫(yī)院不具備細胞培養(yǎng)條件，因而不適于臨床應用，多用于科研和疑難病例的終鑒定。
二、免疫學檢測方法
1.直接熒光抗體測定（DFA）：將針對Ct的單克隆抗體用熒光標記，與標本中的Ct結(jié)合后，熒光顯微鏡檢查就能見到發(fā)熒光的原體（Ebs）。針對脂多糖（LPS）的抗體熒光不夠亮，且染色不勻；而針對主要外膜蛋白（MOMP）的抗體熒光更亮，且減少非特異染色［6］。DFA不象培養(yǎng)法必須存在有活力的Ct，但其敏感性受人群感染率的影響，且有判定結(jié)果帶有主觀性，熒光易淬滅，不適于檢測大量標本等缺點。多數(shù)學者報道其特異性較高，Hallsworth等報道可達100%，因此在科研中常被用作確證試驗。由于此法操作簡便、費用低廉，在不具備分子生物學試驗條件的醫(yī)院，可用以檢測臨床標本但也需經(jīng)驗豐富者操作。
2.酶免疫測定（EIA）：用酶標記的單克隆或多克隆抗體檢測Ct的LPS或MOMP，酶反應生成有色產(chǎn)物，用酶標儀進行測定。目前有Chlamydiazyme、ID-EIA、Pharmacia Chlamydia EIA等多種市售診斷試劑盒可供使用。其敏感性從64%到98%，特異性從93%到98%通常認為，其敏感性在高危人群中可得到滿意結(jié)果，而在新近感染及治療監(jiān)測中敏感性明顯下降。EIA的優(yōu)點在于方法簡便、操作自動化，適于短時內(nèi)大批量標本的檢測。但其最大缺點在于，與其他常見微生物產(chǎn)生交叉反應，如金黃色葡萄球菌、A群及B群鏈球菌、淋病奈瑟菌、醋酸鈣不動桿菌、肺炎克雷伯菌及其他革蘭陰性細菌，從而使特異性達不到100%。國外此法多用于高危人群的篩查，國內(nèi)應用較少。
三、分子生物學檢測方法
1.直接檢測核酸的技術(shù)（即基因探針技術(shù)）：此技術(shù)利用核酸分子的復性原理，用特定的標記探針去檢測標本中的靶核酸。最初為放射性標記，后來逐漸發(fā)展為酶或化學發(fā)光試劑標記。目前有美國圣地亞哥Gen-Probe公司生產(chǎn)的發(fā)光標記基因探針試劑盒PACE-2。與培養(yǎng)法相比，Gen-Probe方法的敏感性和特異性分別為73%～96%和98%～99%尚無培養(yǎng)法敏感和特異。由于此法成本高、步驟繁瑣，隨著核酸擴增技術(shù)的出現(xiàn)，基因探針技術(shù)也就失去了其應用價值。
2.核酸擴增技術(shù)：繼基因探針技術(shù)之后，很快出現(xiàn)了核酸擴增技術(shù)，這些技術(shù)包括（1）靶DNA或RNA的擴增，如聚合酶鏈反應(PCR)，基于轉(zhuǎn)錄的擴增(TBA)，自動維持序列擴增(3SR) 以及鏈置換擴增(SDA)；（2）探針擴增，如連接酶鏈反應(LCR)，Q-β復制酶的擴增；（3）雜交后信號的擴增，如復合探針和分支DNA探針。其中研究和
用較多的是PCR和LCR，尤其是PCR技術(shù)，有學者認為其將對感染診斷引起革命性變化
PCR屬于一種核酸體外擴增技術(shù)，用寡核苷酸指導的DNA合成的重復循環(huán)來實現(xiàn)對靶核酸序列的擴增。PCR每個循環(huán)包含變性、退火、延伸3個步驟，在不到2小時內(nèi)，經(jīng)過30個循環(huán)，在理論上可將最初的靶DNA擴增109倍。最后可用凝膠電泳或探針雜交檢測擴增的DNA。由于先將標本中的核酸特異成分先行擴增復制再行檢出，其敏感性較直接檢測核酸大大提高。
目前國內(nèi)外用于構(gòu)建引物的衣原體DNA有7.5Kb質(zhì)粒、MOMP基因（omp1）和16SrRNA基因。診斷試劑盒AMPLICOR Ct PCR已通過食品與藥品管理局(FDA)的審批，其擴增靶序列即為質(zhì)粒DNA。許多研究都已表明，PCR較培養(yǎng)法和EIA法都要敏感［7，9，11］，而且PCR對于有癥狀或無癥狀人群同樣敏感［3］。但基于不同引物的PCR的敏感性仍有所不同。Roosendaal等［12］的研究表明，質(zhì)粒引物PCR最敏感，omp1引物PCR最不敏感，16SrRNA基因引物PCR介于兩者之間。這可解釋為在每個衣原體細胞中DNA拷貝數(shù)不同的緣故。雖然omp1引物PCR敏感性較質(zhì)粒PCR為差，但omp1引物PCR擴增的特異性好，而且Palmer等報道通過巢式PCR，經(jīng)過2輪擴增，同樣能夠達到質(zhì)粒引物PCR的敏感性。并且omp1擴增后，利用限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）還可對Ct進行基因分型，這對流行病學調(diào)查具有重要意義。
PCR技術(shù)不但能檢測尿道或?qū)m頸拭子標本，而且可以采用尿標本進行檢測。但尿中可能存在擴增的抑制物，從而影響PCR的敏感性。Verkooyen等報道將標本進行預先的加熱處理或使用2SP轉(zhuǎn)運培養(yǎng)基可顯著降低AMPLICOR Ct PCR對抑制因子的易感性。將臨床標本加熱處理后10倍稀釋亦可在很大程度上防止這種抑制。除了尿中的抑制物會影響PCR的敏感性，導致出現(xiàn)假陰性結(jié)果外，PCR的另外一個缺點是由于其本身技術(shù)原理的原因，容易造成假陽性污染。
近年亦有學者應用LCR檢測Ct。LCR屬于一種探針擴增技術(shù)，是依賴靶核酸序列的寡核苷酸探針的連接技術(shù)。Abbott LCR-CT診斷試劑盒也已通過FDA的審批。同PCR相比，由于使用兩對引物，用LCR檢測Ct感染，具有更高的敏感性和特異性［16］。但連接酶價格昂貴，難以在臨床普及應用，僅適用于科研，且國內(nèi)應用較少。
最新發(fā)展的擴增試驗是Gen-Probe公司的擴增Ct的轉(zhuǎn)錄介導擴增試驗（TMA），擴增并檢測Ct的rRNA。TMA的一個優(yōu)點是每個感染細胞中有大量的rRNA。而且操作步驟簡便，只是一個恒溫過程，不需要變換溫度的擴增儀。Crotchfelt等［17］報道TMA檢測女性尿標本的敏感性和特異性分別為93.8%和100%，男性尿標本為95.6%和98.7%，提示TMA將成為另外一種能利用尿標本檢測Ct的擴增方法。國內(nèi)尚無采用該法進行檢測的報道。
目前除了發(fā)展各種核酸擴增技術(shù)，國外學者們又將眼光投向了標本取材方面的改進上。除尿標本外，外陰標本也可能作為一種非侵入性標本而適用于PCR、LCR和TMA等高度敏感的擴增方法，在篩查高危人群中可能會替代侵入性標本［18］。測試外陰涂片標本可以節(jié)省用于尿標本離心的時間，而且可以由患者自行取材［19］。另外，為節(jié)省時間和費用，有學者嘗試，同時進行幾種性傳播疾病病原體的共同擴增，但結(jié)果不盡如人意［20-22］。
綜上所述，結(jié)合國內(nèi)情況，泌尿生殖道Ct感染的實驗診斷中，經(jīng)典的細胞培養(yǎng)方法雖然特異，但耗時長、費用大，且不夠敏感，不適于臨床開展；免疫學方法簡便快捷，在基層醫(yī)院具有實用性；在具備分子生物學實驗條件的醫(yī)院，由于PCR方法高度敏感特異，可檢測各發(fā)病率人群，只要嚴格規(guī)范操作，避免假陰性及假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，可望在Ct感染診斷中常規(guī)使用?？傊?，Ct感染的診斷目前已發(fā)展到分子生物學水平，隨著科學技術(shù)的不斷進步，下個世紀有可能利用生物芯片等更新的技術(shù)進行檢測。我們應密切注視檢測技術(shù)的發(fā)展，以便準確、快速地對Ct感染作出診斷。