中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)凍干菌株的復(fù)活和檢查!
中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng) / 2019-03-02 11:35:00
中國(guó)微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)凍干菌株的復(fù)活和檢查!
1.復(fù)活菌株
選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件(根據(jù)生產(chǎn)商說(shuō)明）進(jìn)行復(fù)活。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從菌種保藏中心購(gòu)買(mǎi)的凍干菌種為第0代。
（1）細(xì)菌
用無(wú)菌吸管吸0.5ml 液體培養(yǎng)基加到凍干菌塊上，吹打混勻成懸液，將全部懸液移入含有5ml合適的肉湯培養(yǎng)基中。將管中殘留的幾滴懸液移種到斜面上。在合適的條件下培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)溫度通常為25℃或37℃。多數(shù)凍干菌株會(huì)在幾天后長(zhǎng)出，但是少數(shù)菌會(huì)表現(xiàn)出延滯期延長(zhǎng)的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時(shí)間加倍。
（2）噬菌體
首先應(yīng)準(zhǔn)備18h?24h的宿主細(xì)菌培養(yǎng)物，往凍干噬菌體中加1.0ml肉湯（視宿主細(xì)菌而定)混勻，吸0.1ml懸液到0.9ml肉湯中，依次系列稀釋。每個(gè)稀釋度的稀釋液一滴接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的平板上，每平板采用3個(gè)?4個(gè)稀釋度。過(guò)夜培養(yǎng)后可出現(xiàn)噬菌斑。
（3）霉菌和酵母菌
用無(wú)菌吸管吸0.5 ml?1ml無(wú)菌水到凍干菌塊上，將全部?jī)?nèi)容物移入裝有5 ml，無(wú)菌水的試管中進(jìn)行復(fù)水，2 h（或過(guò)夜）后移種到肉湯或固體瓊脂上，在合適的溫度下培養(yǎng)，真菌培養(yǎng)溫度通常是25℃。少數(shù)培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出延滯期延長(zhǎng)的現(xiàn)象,需要將正常培養(yǎng)時(shí)間加倍。
如菌株在推薦的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時(shí)間等適宜的條件下培養(yǎng)不生長(zhǎng)，須滅菌處理之后方可丟棄。
2.菌種純度檢査和確認(rèn)
(1)菌落形態(tài)
取復(fù)活后的培養(yǎng)物，在相應(yīng)的鑒別平板或普通非選擇性平板上劃線分離，培養(yǎng)出單菌落，觀察菌落形態(tài)是否符合，同一平板上的單菌落的大小、形狀、顏色、質(zhì)地、光澤等是否相似；對(duì)于出現(xiàn)兩種或以上形態(tài)的菌株，應(yīng)再分別挑取單菌落劃線或稀釋涂布培養(yǎng)，檢測(cè)是否重復(fù)出現(xiàn)相同特征。
（2）細(xì)胞形態(tài)
對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的培養(yǎng)物的革蘭氏染色反應(yīng)應(yīng)呈現(xiàn)一致性；細(xì)胞形狀、大小、鞭毛、莢膜等特征應(yīng)相似。
（3）芽孢大小、位置、形狀
形成芽孢的菌種，其芽孢大小、位置、形狀應(yīng)相似。
（4）生化鑒定
必要時(shí)進(jìn)行生化鑒定等實(shí)驗(yàn)。
(5)污染處理
如發(fā)現(xiàn)菌種有污染，需要分離挑選目標(biāo)菌株培養(yǎng)成功后將污染培養(yǎng)物做滅菌處理。