中國微生物菌種查詢網(wǎng) 細(xì)菌染色是細(xì)菌學(xué)的一個重要而基本的技術(shù)。由于細(xì)菌個體微小，無色且半透明，直接在普通光學(xué)顯微鏡下觀察，往往不易識別，只能大致見到其外形。因此，借助于染色法可使細(xì)菌著色，與背景形成鮮明的對比，便于在顯微鏡下進(jìn)行觀察，能較清楚地顯示其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。此外，由于細(xì)菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分不同而呈現(xiàn)出不同的染色反應(yīng)，可以作為鑒別細(xì)菌的一種依據(jù)。
一、載玻片的處理
載玻片應(yīng)清晰透明、清潔而無油漬，滴上水后能均勻展開，附著性好，如有殘余油漬，可按下列方法處理。
1、滴上95%酒精2-3滴，用清潔紗布擦拭，然后在酒精燈外焰上輕輕拖過幾次。
2、若上法仍未能除去油漬，可再滴上1-2滴冰醋酸，用紗布擦凈，再在酒精燈火外焰上輕輕拖過。
玻片潔凈后，用玻璃鉛筆在預(yù)涂材料處的背面劃一個直徑1.5cm的圓圈，用以標(biāo)記。
二、涂片方法
根據(jù)涂片所用的材料不同，抹片方法也有差異。
1、菌落等非液體材料涂片方法
對于菌落、膿、糞便等非液體材料，涂片時，左手握菌種管，右手持接種環(huán)（又稱鉑金耳），取1-2環(huán)生理鹽水，置于玻片上，然后將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷后，釣取少許菌落、膿或糞便等材料，置于生理鹽水中混勻，涂成直徑約1.5cm的涂膜，此膜既薄又均勻為好，待干即可。
2、液體（菌液）材料涂片法
如細(xì)菌液體培養(yǎng)物、血清、組織滲出液、乳汁等，可直接用滅菌接種環(huán)取1-2環(huán)材料，均勻涂抹在載玻片上，使成直徑為1.5cm左右圓形或橢圓形涂膜，自然干燥后備用。
3、血液涂片方法
先取一張干凈無油垢邊緣整齊的載玻片，其一端沾取少許血液，以45度角放在另一張干凈無油垢的載玻片一端，從這端向另一端推成薄而均勻的血膜，待干后備用。
4、組織臟器涂片方法
先用鑷子夾持組織中部，然后以滅菌剪刀剪取一小塊組織，用鑷子夾出后，以組織塊新鮮切面在載玻片上壓印(觸片)或涂成一薄層，待干后備用。
三、干燥
涂片最好在室溫中自然干燥。必要時，可將標(biāo)本面向上，在離酒精燈火焰遠(yuǎn)處烘干，切勿緊靠火焰，以免標(biāo)本糊焦而不能檢查。
四、固定
有兩種固定方法：
1、火焰固定
將已干燥好的抹片，使涂面向上，以其背面在酒精燈外焰上如鐘擺樣來回拖過數(shù)次，略作加熱(但不能太熱，以不燙手為度)進(jìn)行固定。放置冷卻后，進(jìn)行染色。
2、化學(xué)固定
血液、組織、臟器等抹片作吉姆薩染色或單染色時，不用火焰固定而用甲醇固定，可將已干燥的抹片浸入甲醇中2-3分鐘，取出晾干；或在抹片上滴加數(shù)滴甲醇，使其作用2-3分鐘后，自然揮發(fā)干燥，抹片作瑞氏染色時則不必作特別固定，染色液中含有甲醇可以達(dá)到固定的目的。
抹片固定的目的是：
1、使菌體蛋白凝固附著在載玻片上，以防染色過程中被水沖掉。
2、改變細(xì)菌對染料的通透性，因活細(xì)菌一般不允許染料進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)。
3、能殺死抹片中的部分微生物。
必須注意的是，在抹片固定過程中，實際上并不能保證殺死所有細(xì)菌，也不能完全避免在染色水洗時不將部分涂抹物沖掉。因此，在制備烈性病原菌，特別是帶芽胞的病原菌抹片和染色時，就嚴(yán)格處理染色用過的殘液和抹片本身，以免引起病原的擴(kuò)散。