噬菌體裂解法快速檢測結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-01-18 09:26:45
傳統(tǒng)經(jīng)典的結(jié)核分枝桿菌(TB菌)培養(yǎng)、鑒別的檢測方法操作繁瑣、耗時,不能滿足臨床診斷的需要。筆者采用結(jié)核分枝桿菌噬菌體裂解法快速檢測結(jié)核病患者標(biāo)本中的結(jié)核分枝桿菌的有無,能快速為臨床診療提供可靠的依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
結(jié)核分枝桿菌噬菌體裂解法試劑盒(FASTPlaqeTBTM)購自英國Biotec公司。
1.2 檢測對象
150份結(jié)核菌標(biāo)本源于本院已確診為結(jié)核病的住院患者。
1.3 臨床標(biāo)本前處理
挑取2～5 ml痰液于50 ml無菌離心管中,加1倍體積的4% NaOH溶液液化,漩渦振蕩、打散痰液,20 min后,離心15 min,4 000 r/min棄去上清液。加無菌液(C液)20 ml,重懸下層沉淀,離心15 min,4 000 r/min,棄去上清液。重復(fù)加入C液1 ml,重懸沉淀物,無菌條件下轉(zhuǎn)移至反應(yīng)管中。胸腹腔積液、腦脊液和尿液標(biāo)本離心后棄去上清液,無菌條件下加入C液1 ml后轉(zhuǎn)入反應(yīng)管中。
1.4 培養(yǎng)基的制備
分別取噬菌體(D液)100 μl于陽性對照、陰性對照及標(biāo)本中,輕輕搖晃,確保試管內(nèi)容物位于試管底部,37℃孵育60 min。分別加入100 μl殺菌劑(F溶液)于陽性對照、陰性對照及標(biāo)本中,充分混勻(確保殺菌劑與反應(yīng)管內(nèi)壁完全接觸),置室溫5 min后,分別加入5 ml培養(yǎng)液(C液)和1 ml指示細胞(E液)于陽性對照、陰性對照及標(biāo)本中。上述混合培養(yǎng)物與5 ml已溶解冷卻至(55±2)℃的瓊脂溶液(G液)于培養(yǎng)皿中快速混勻。待凝固成型后,放37℃培養(yǎng)18～24 h,判讀結(jié)果。
1.5 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)
培養(yǎng)皿中出現(xiàn)大小不等的噬菌斑,且≥20個/平皿,或許多噬菌斑相互融合成透明狀判定為陽性;平皿中無噬菌斑出現(xiàn)或噬菌斑數(shù)量。