生物指示劑芽孢濃度測定試驗詳情！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2019-01-16 08:30:57
隨著質(zhì)量風(fēng)險控制理念的深入，滅菌工藝研究在我國醫(yī)藥領(lǐng)域中日益受到重視。生物指示劑可以對滅菌工藝進(jìn)行設(shè)定、確認(rèn)和監(jiān)測。評估生物指示劑的兩個主要指標(biāo)分別是孢子數(shù)和D值。活孢子總數(shù)測試是生物指示劑用戶在進(jìn)貨檢驗時的一種常見的測試。
1、試驗原理
休眠期的芽孢如果受到外在的誘導(dǎo)，比如受到熱刺激，會從休眠狀態(tài)復(fù)蘇，有利于檢測。用活細(xì)胞計數(shù)法對激活為生長狀態(tài)的芽孢桿菌進(jìn)行計數(shù)，最常用的是平板菌落計數(shù)法，是根據(jù)每個活的細(xì)菌能長出一個菌落的原理設(shè)計的。
2 試驗方法
取出菌片：將生物指示劑的菌片、芽孢條、不休鋼片等帶菌載體從生物指示劑的外包裝中取出，裝入內(nèi)置玻璃珠的裝有無菌水的平底試管中。如果是SterilAmp II、SterilAmp II “5230”和MagnaAmp生物指示劑，隨機(jī)選擇4個安剖瓶放入高硼硅瓶，使用無菌不銹鋼棒或無菌鑷子將安剖瓶敲碎，用無菌純化水沖洗破碎裝置，流入高硼硅瓶，補(bǔ)充一定量無菌水，轉(zhuǎn)移一定量菌液至平底試管中。
超聲處理：將裝有生物指示劑的試管進(jìn)行超聲處理。超聲清洗儀的頻率45-60kHz。注意Apex 生物指示劑的超聲不少于15分鐘。
系列稀釋：取一定體積的菌懸液，作一系列的倍比稀釋。注意每次稀釋時需先渦旋，渦旋后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)移。
熱擊處理：根據(jù)受試微生物種類（見表1）在熱水浴中對每個試管進(jìn)行熱 擊，將樣品插入到熱水浴中時立即開始計時。熱擊后取出試管，并在冰浴中迅速冷卻。
涂板培養(yǎng)：取0.1 mL菌液轉(zhuǎn)移至胰酪蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中（采用澆注法或涂布法兩種不同平皿計數(shù)方式），按照表1中的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后進(jìn)行菌落計數(shù)。
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