中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) 內(nèi)毒性也稱為脂多糖或LPS，是革蘭氏陰性（如大腸桿菌，E.coli）胞膜上一種成分。細(xì)菌外膜的外部脂質(zhì)成分完全由內(nèi)毒素分子組成。一個(gè)E.coli包含約2百萬(wàn)個(gè)LPS分子，每個(gè)LPS分子又由疏水性的脂質(zhì)A、復(fù)雜的多糖鏈以及帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)組成。因此每個(gè)內(nèi)毒素既包含疏水區(qū)域也包含了親水和帶電區(qū)域，從而賦予其與其它分子相互作用的獨(dú)特性質(zhì)。細(xì)菌在其活躍生長(zhǎng)時(shí)表面的內(nèi)毒素成分較少，而一旦其死亡則會(huì)釋放大量?jī)?nèi)毒素。在質(zhì)粒提取的裂解過(guò)程中，內(nèi)毒素會(huì)從細(xì)菌的外膜釋放到裂解液中。
內(nèi)毒素污染廣泛存在于多種不同形式的質(zhì)粒提取方法
內(nèi)毒素分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)、特性及其傾向于形成微團(tuán)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，使其常與質(zhì)粒DNA共存從而被共同純化出來(lái)。
.以CsCl超速離心純化為例，內(nèi)毒素分子度與質(zhì)粒-EB復(fù)合體在CsCl中的密度幾乎相當(dāng)，因此純化得到的DNA中內(nèi)毒素污染依然存在。
.同樣的，在基于分子大小的層析樹(shù)脂純化法也難以區(qū)分內(nèi)毒性分子形成的大體積微團(tuán)與大分子DNA。
.再者，陰離子交換樹(shù)脂純化法中，由于內(nèi)毒素分子攜帶的負(fù)電荷也會(huì)與交換樹(shù)脂相互作用，因此內(nèi)毒素和DNA也會(huì)被一同純化出來(lái)。
但是質(zhì)粒中內(nèi)毒素污染的程度與純化的方法很有關(guān)系。QIAGEN質(zhì)粒提取試劑盒與2次CsCl梯度離心法均可得到低內(nèi)毒素的高純度DNA。而硅膠柱法純化的DNA內(nèi)毒素污染要嚴(yán)重的多。而使用EndoFree Plasmid Kits提取的DNA中內(nèi)毒素的含量幾乎可以忽略（<0.1 EU/?g）。
內(nèi)毒素如何測(cè)定?
歷史上，內(nèi)毒素測(cè)定主要是基于內(nèi)毒素與鱟（一種海洋節(jié)支動(dòng)物，也稱馬蹄型蟹）血液中的變形細(xì)胞凍融后的溶解物（鱟試劑）接觸時(shí)可發(fā)生凝血反應(yīng)。鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝膠反應(yīng)的機(jī)理是：鱟的血液及淋巴液中有一種有核的變形細(xì)胞，胞漿內(nèi)有大量的致密顆粒，內(nèi)含凝固酶及凝固蛋白原。當(dāng)內(nèi)毒素與鱟變形細(xì)胞凍融后的溶解物（鱟試劑）接觸時(shí)，可激活凝固酶原，繼而使可溶性的凝固蛋白原變成凝固蛋白而使鱟變形細(xì)胞凍融物呈凝膠狀態(tài)?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展出更加靈敏的光度計(jì)測(cè)試方法，該方法主要基于鱟試劑以及一種人工合成的可產(chǎn)生顏色反應(yīng)的底物。
LPS污染通常用內(nèi)毒素單位（Endotoxin Units, EU）表示，通常情況下，1ng LPS對(duì)應(yīng)于1到10個(gè)EU。
內(nèi)毒素對(duì)于下游生物應(yīng)用的影響
內(nèi)毒素會(huì)對(duì)原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染產(chǎn)生嚴(yán)重影響，同樣也會(huì)影響對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的敏感性，內(nèi)毒素水平增加可導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率的大幅下降。進(jìn)而，使用無(wú)內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA對(duì)于基因治療方面的應(yīng)用尤為重要，因?yàn)閮?nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致發(fā)熱、內(nèi)毒素休克并會(huì)在動(dòng)物和人體中激活補(bǔ)丁級(jí)聯(lián)反應(yīng)。內(nèi)毒素也會(huì)對(duì)體外轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞造成干擾，因?yàn)槠淇煞翘禺愋缘恼T發(fā)免疫反應(yīng)。反應(yīng)包括合成免疫遞質(zhì)如IL-1和前列腺素。為了防止對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成誤判，實(shí)驗(yàn)中務(wù)必使用無(wú)內(nèi)毒素污染的塑料制品、培養(yǎng)基、血清以及質(zhì)粒DNA。
內(nèi)毒素的去除
QIAGEN采用了擁有專利的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒操作方法，該方法在QIAGEN標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)粒純化方法的基礎(chǔ)上增加了去除內(nèi)毒素的步驟。中和后的細(xì)菌裂解液經(jīng)QIAfilter Cartridge過(guò)濾后與特殊的去內(nèi)毒素緩沖液（Buffer ER）共同冰浴。去內(nèi)毒素緩沖液可以防止LPS分子結(jié)合到QIAGEN-tips中的樹(shù)脂上，從而保證最終純化的DNA每微克中含有的內(nèi)毒素小于0.1EU。
使用無(wú)內(nèi)毒素的塑料和玻璃制品
為了防止質(zhì)粒中內(nèi)毒素在初次去除以后會(huì)被再次污染，我們推薦只使用經(jīng)認(rèn)證無(wú)熱源或無(wú)內(nèi)毒素的全新塑料制品。目前已有多個(gè)廠家可以提供無(wú)熱源或無(wú)內(nèi)毒素的塑料制品。內(nèi)毒素會(huì)牢固的吸附在玻璃制品上，并且在清洗的過(guò)程中也難以完全去除。實(shí)驗(yàn)室使用的標(biāo)準(zhǔn)滅菌步驟對(duì)內(nèi)毒素幾無(wú)效果。而且如何高壓滅菌器之前曾用于細(xì)菌相關(guān)應(yīng)用，反而會(huì)加重玻璃制品的內(nèi)毒素污染。我們推薦將玻璃制品180℃高溫烘烤過(guò)夜，以去除任何附著的內(nèi)毒素分子。關(guān)于更多的去除內(nèi)毒素的方法，請(qǐng)參考相應(yīng)的文獻(xiàn)。為了避免純化得到的無(wú)內(nèi)毒素DNA不會(huì)再次污染，請(qǐng)不要使用沒(méi)有去除內(nèi)毒素的試劑。