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避免抗體污染或損傷的最佳保存方法?是什么?
中國微生物菌種查詢網 / 2018-12-04 09:10:09

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保存溫度和條件
       對于很多抗體而言,分裝成小等份并存于-20度或-80度是最佳保存條件。分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于4度。在收到抗體時,在10,000×g下離心20秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液,并以小等份轉移至低蛋白結合微量離心管中。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應不小于10ul;等份越小,儲液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
        在大多數(shù)情況下,收到抗體時在4度下保存一至兩周,然后再冷凍進行長期保存是可接受的,但也許腹水液是例外,它是包含蛋白酶,因而應該盡快凍存。同樣,遵照說明書上的建議是重要的。
特別注意:
酶偶聯(lián)抗體不應凍存,而應保存于4度。凍融不僅影響抗體結合能力,還會降低酶活性。
無論偶聯(lián)是熒光染料、酶還是生物素,偶聯(lián)抗體都應保存于深色試劑瓶中或用錫箔紙包裹。暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響,在實驗的所有階段都應避光。
IgG3同型抗體具有解凍時形成聚集物的獨特趨勢,應始終保存于4度。
用疊氮化鈉防止污染
       為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉加入抗體制備品中達到0.02%(W/V)的終濃度。很多抗體已經包含這種防腐劑,所用濃度為0.02至0.05%。
不使用疊氮化鈉的情形:
        如果用抗體染色或處理活細胞,或如果用抗體進行體內研究,一定要使用不包含疊氮化鈉的制備品。該抗菌劑也對大多數(shù)其他生物具有毒性:它阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
         疊氮化鈉會干擾氨基參與的任何偶聯(lián),應在偶聯(lián)進行前除去。偶聯(lián)后,抗體可保存于疊氮化鈉中,除此之外,0.01%硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。
         疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG的分子量為150,000道爾頓(IgM為約600,000);疊氮化鈉的分子量為65道爾頓。截留分子量為14,000道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時使疊氮化物向外擴散。在保存于4度的磁性攪拌器上的燒杯中,每毫升抗體使用至少一升冷PBS并攪拌透析裝置6小時。更換PBS兩次,每次更換攪拌至少6小時。如有可能,所有材料都應滅菌并且所得的制備物應無菌操作。
冷凍/融化損傷
      重復冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性,導致其形成使抗體結合能力降低的聚集物。
      保存于-20度對于大多數(shù)抗體是適合的;保存于-80度無明顯優(yōu)勢。冰箱不能為無霜型。這些冷凍和融化之間的循環(huán)(以減少結霜)恰恰是應該避免的。出于相同原因,抗體試劑瓶應置于具有最小溫度波動的冰箱區(qū)域,例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
        有些研究人員加入冷凍保護劑甘油達到50%的終濃度以防止冷凍/融化損傷;甘油可將凝固點降低至低于-20度。雖然這對于很多抗體是可接受的,但是在該保存條件下的抗體穩(wěn)定性也需要考慮。不建議將包含甘油的溶液保存于-80度,因為該溫度低于甘油的凝固點。請注意甘油可被細菌污染。如果加入甘油或冷凍保護劑,則應當小心操作,以得到無菌制備物。
        應避免抗體在稀釋至工作濃度后在4度下保存超過一天。蛋白質在高濃度下保存時一般不易降解,理想的濃度為1mg/ml或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質例如BSA作為穩(wěn)定劑的理論基礎。加入的蛋白質也有助于減少抗體因結合于容器壁上而造成的損傷。對于打算進行偶聯(lián)的抗體而言,由于穩(wěn)定蛋白質會與抗體競爭,降低了偶聯(lián)的效率,所以不應加入穩(wěn)定蛋白質。
抗體保存指南:如果恰當保存和處理,大多數(shù)抗體應能保持活性數(shù)月乃至數(shù)年。

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