一、瑞氏染料的組成及染色原理
瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)和酸性染料黃色伊紅組成，合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏（美藍(lán)-伊紅）染料。
伊紅鈉鹽的有色部分為陰離子，無(wú)色部分為陽(yáng)離子，其有色部分為酸性，故稱伊紅為酸性染料。美藍(lán)通常為氯鹽，呈堿性，美藍(lán)的中間產(chǎn)物結(jié)晶為三氯化鎂復(fù)鹽，其有色部分為陽(yáng)離子，無(wú)色部分為陰離子，恰與伊紅鈉鹽相反。
瑞氏染料中的酸性伊紅和堿性美藍(lán)混合經(jīng)化學(xué)作用后，變成中性伊紅化美藍(lán)，如染液放置過(guò)久即可氧化而含有天青。美藍(lán)天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍(lán)色，多余美藍(lán)就可以使胞漿染成藍(lán)色，染色主要是化學(xué)作用，是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。
二、瑞氏染色液配制方法
瑞氏染液配制：
瑞氏染料：0.1g
甘油：1.5ml
甲醇：60ml
先稱干燥（事先放入溫箱干燥過(guò)夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)， 用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再研磨至細(xì)粉末，加入甘油和少量甲醇溶解，繼續(xù)研磨至無(wú)染料粉粒沉著，再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲(chǔ)存瓶?jī)?nèi)（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，直至乳缽內(nèi)染料完全溶解為止。搖勻，密封瓶口，室溫避光保存。
新鮮配制的瑞氏染液偏堿，染色效果較差，經(jīng)在室溫下貯存一定時(shí)間，美藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樘烨嗪蠓娇墒褂茫@一過(guò)程稱染料成熟。放置時(shí)間愈久，天青愈多，染色效果也就越好。一般儲(chǔ)存3個(gè)月以上為佳。但必須蓋嚴(yán)瓶口，以免甲醇揮發(fā)或氧化成甲酸。染液中加中性甘油的目的也是防止甲醇揮發(fā)或氧化，同時(shí)也可使血細(xì)胞染色較清晰，但使用的甲醇必須純凈。
甲醇是瑞氏染料的良好溶劑，在染色中甲醇還具有兩種作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)與伊紅在溶液中離解，可使細(xì)胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。
（2）甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對(duì)染料吸收作用，同時(shí)由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。
三、染色方法
1、取病料、血液或菌液涂片、自然干燥；
2、滴加瑞氏染液，染色3分鐘，使標(biāo)本被染色液中的甲醇所固定；
3、加等量pH6.4的磷酸鹽緩沖液(也可用等量蒸餾水或超純水代替PBS)，輕輕晃動(dòng)玻片，均勻靜置3-5分鐘；
4、用蒸餾水沖洗、吸干、鏡檢。
5、染色結(jié)果：細(xì)菌染成藍(lán)色，組織細(xì)胞胞漿呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色或紫色。
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