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艾氏甲烷球菌
Methanococcus aeolicus 拉丁名
ATCC BAA-1280 編號(hào)
Strain DesignationsATCC菌種別名 Nankai-3
Isolation 分離基物
Sediment, saltwater
isolation date: 2003
Biosafety Level 安全等級(jí) 1
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
Product Format 提供形式 frozen
Preceptrol no
Genome Sequenced Strain
Methanococcus aeolicus Nankai-3, complete genome.
Type Strain 模式菌株 yes
Comments Genome sequenced strain
Medium 培養(yǎng)基 ATCC Medium 1439: Methanogenium medium
Growth Conditions 生長(zhǎng)條件
Atmosphere 需氧情況 : hydrogen (H2), 80%; carbon dioxide (CO2), 20%
Temperature 培養(yǎng)溫度 : 37.0°C
Name of Depositor 寄存人 M Kendall
Special Collection 來(lái)源國(guó)家 ATCC
Isolation 分離基物
培養(yǎng)基：ATCC?Medium1439：Methanogenium
成長(zhǎng)條件：氣氛：氫氣（H2），80％;二氧化碳（CO2），20％
傳播程序
1.用70％乙醇噴灑Balch管頂部，然后燃燒頂部。
2.將試管中的氣體換成80％H2 20％CO2，不要超過(guò)5psi加壓。如果管子過(guò)壓（20磅/平方英寸），接種管子將很困難。
3.用于接種的預(yù)備管：如果培養(yǎng)基是粉紅色的（參見關(guān)于刃天青B的討論），每100ml培養(yǎng)基中加入2.0ml還原劑（5％輔酶M儲(chǔ)備溶液）。在接種之前，讓培養(yǎng)基在室溫下靜置至少1小時(shí)或直至刃天青變?yōu)闊o(wú)色。
4.在溫和的厭氧氣體流下將冷凍小瓶打開。使用厭氧（參見E）1.0ml注射器用22ggege針頭傾斜，從小瓶中取出細(xì)胞懸浮液并轉(zhuǎn)移到ATCC＃1439培養(yǎng)基的管中。將0.5ml接種的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到第二管ATCC培養(yǎng)基＃1439中。用80％H 2 20％CO 2將培養(yǎng)管加壓至20psi。將0.1ml接種的培養(yǎng)物加到非選擇性培養(yǎng)基上，在37℃有氧培養(yǎng)。將培養(yǎng)管在37oC孵育。
5.應(yīng)在4到6天內(nèi)在肉湯中檢測(cè)到生長(zhǎng)。在好氧板上不應(yīng)檢測(cè)到生長(zhǎng)。
厭氧條件：
A.Balch管（可從Bellco Glass，Vineland，NJ獲得;專門用于厭氧工作并使用鋁壓接帽將橡膠塞固定到位。針可以很容易地通過(guò)塞子插入，管可以加壓到或者，可以使用血清小瓶，或者使用帶有丁基橡膠塞的螺旋蓋管，在后一種情況下，可以移除塞子并將管放置在套管系統(tǒng)下，該套管系統(tǒng)分配無(wú)菌的無(wú)氧氣體以添加還原劑或接種。
B.Resazurin是一種常用的氧化還原指示劑，當(dāng)氧化還原電位高于50 mv時(shí)為粉紅色，當(dāng)氧化還原電位低于110 mv時(shí)為無(wú)色。即高度減少。最嚴(yán)格的厭氧菌需要這種低氧化還原電位才能實(shí)現(xiàn)最佳生長(zhǎng)。
C.為了獲得完全還原的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基必須是缺氧的并且添加還原劑。常見的還原劑是硫化鈉，半胱氨酸，二硫蘇糖醇，檸檬酸鈦和輔酶M。
D.我們建議在接種培養(yǎng)基之前至少一小時(shí)將還原劑加入培養(yǎng)基中。輔酶M（巰基乙磺酸）（100×溶液）：將5.0g溶于100ml去離子水中。分配到螺旋蓋試管中，每管56毫升，并在氮?dú)庀掠孟鹉z塞密封。高壓滅菌消毒。多余的管可以在室溫下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)2個(gè)月。輔酶M是由許多產(chǎn)甲烷菌產(chǎn)生的化合物。一些產(chǎn)甲烷菌對(duì)強(qiáng)還原劑如硫化鈉敏感。輔酶M是我們?cè)谑褂卯a(chǎn)甲烷菌時(shí)使用的標(biāo)準(zhǔn)還原劑。
E.Syringes可以通過(guò)兩種方法之一制成無(wú)氧的。