百歐生物提供貼壁細胞傳代技術(shù)說明
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-08-01 07:29:43
1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細胞培養(yǎng)基并丟棄；
2.用不含鈣、鎂的平衡鹽溶液沖洗細胞（每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL溶液）；從與貼壁細胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數(shù)次（注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑的作用的少量血清、鈣和鎂）；
3.從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加預(yù)熱的解離劑；試劑量應(yīng)足以覆蓋細胞層（每10cm2大約0.5mL）；
4.輕輕搖晃容器，使試劑完全覆蓋細胞層；吸出多余解離試劑，T25細胞培養(yǎng)瓶留200ul左右即可；
5.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約2分鐘（請注意實際孵育時間根據(jù)所用細胞系不同而有所差異）；
6.在顯微鏡下觀察細胞解離情況；如果解離程度未達90%，可將孵育時間延長幾分鐘，每30秒鐘檢查一次解離情況；也可輕輕拍打培養(yǎng)容器以加快細胞解離；
7.細胞解離程度大于等于90%時，傾斜培養(yǎng)容器，使細胞上液體盡快流盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱完全生長培養(yǎng)基；吹打細胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；
8.將細胞轉(zhuǎn)移到15ml無菌離心管,中，以200×g的離心力離心3-5分鐘（請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異）；
9.用最少體積的預(yù)熱完全生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將細胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積細胞懸浮轉(zhuǎn)移到新的細胞培養(yǎng)容器中，把細胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，以便進行充分的氣體交換，除非您使用得是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶蓋）。
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