一、極限培養(yǎng)基平板
800 ml水加入15 g瓊脂,高壓滅菌15 min。然后加人200 ml無(wú)菌的5 X 極限培養(yǎng)液和碳源。待冷卻至50°C,加人補(bǔ)充成分。每個(gè)10 cm平板倒入32~40 ml培養(yǎng)基(每升培養(yǎng)基可制作25?30個(gè)平板)。于室溫干燥2?3天,或?qū)⑵桨宓纳仙w稍 微打開(kāi),于37°C或在層流通風(fēng)櫥干燥30 min,將晾干的平板包裹好儲(chǔ)存于4°C。
二、豐富培養(yǎng)基平板
將水加人以下所列出的培養(yǎng)基配方的成分中,定容至1L,高壓滅菌25 mm。待冷卻至50°C,加人補(bǔ)充成分。每個(gè)LB或H培養(yǎng)基平板倒人32~40 ml培養(yǎng)基(每升培養(yǎng)基可制作25?30個(gè)平板),每個(gè)λ肉湯培養(yǎng)基平板倒人約45 ml培養(yǎng)基(每升培養(yǎng)基可制作20個(gè)平板)。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板,每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 瓊脂
2. λ肉湯平板,每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
10 g 瓊脂
3. LB平板,每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 瓊脂或者瓊脂糖
三、添加物
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素(如果需要):
氨芐青霉素 50 μg/ml
四環(huán)素12 μg/ml
2. 半乳糖苷(如果需要):
X-gal終濃度為 20 μg/ml
IPTG終濃度為0. I mmol/L
四、頂層瓊脂培養(yǎng)基
頂層瓊脂培養(yǎng)基常用于將噬菌體或細(xì)胞在平板的表面均勻分布成一薄層。以1 L的 批量配制頂層培養(yǎng)基,高壓滅菌15 min使之熔化,冷卻至50°C,輕輕旋轉(zhuǎn)晃動(dòng)使其混 合均勻,分裝至100 ml瓶中。再次高壓滅菌,冷卻,擰緊蓋子,于室溫保存。使用前, 用水浴或者微波爐熔化頂層瓊脂,冷卻至45?50°C并維持在該溫度。頂層瓊脂中瓊脂 的含量比普通平板的少,在該溫度下,頂層瓊脂可保持熔化狀態(tài)數(shù)天。
1. LB 頂層培養(yǎng)基,每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 瓊脂
2. γ頂層球脂培基,每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
7 g 瓊脂
3. 頂層瓊脂糖培養(yǎng)基,每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 瓊脂糖
五、穿刺瓊脂培養(yǎng)基
穿刺瓊脂培養(yǎng)基用來(lái)保存菌株。加人胸腺嘧啶則可使thy-細(xì)菌生長(zhǎng)。據(jù)認(rèn)為,半胱氨酸可很大程度地延長(zhǎng)細(xì)菌在穿刺培養(yǎng)物中的存活時(shí)間。
1. 穿刺培養(yǎng)基,每升
10 g 營(yíng)養(yǎng)肉湯
5 g NaCl
6 g 瓊脂
10 mg 半胱氨酸鹽-Cl
10 mg 胸腺嘧啶
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