一、基本原理
彎曲桿菌（Campylobacter spp.）是一種重要的食源性病原菌。彎曲桿菌屬（Campylobacter genus）包括6個種及若干亞種。其中空腸彎曲桿菌(C. jejuni)、結(jié)腸彎曲桿菌(C. coli)和胎兒彎曲桿菌(C. fetus)占所有從人體分離的99%（空腸彎曲桿菌占90%）。空腸彎曲桿菌為革蘭氏陰性微需氧細菌。其培養(yǎng)條件苛刻，在空氣中不能生長，在普通培養(yǎng)基上也難以培養(yǎng)。在微需氧條件下（85 % N2, 5% O2 和10% CO2）在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)48小時可見無色半透明的小菌落，最適生長溫度為42°C，在37°C下也能培養(yǎng)，但生長速度較慢。彎曲桿菌增菌用布氏肉湯液體培養(yǎng)基。常用的生長培養(yǎng)基為Skirrow固體培養(yǎng)基和Camp-BAP固體培養(yǎng)基。彎曲桿菌耐藥實驗所用培養(yǎng)基為MH固體培養(yǎng)基。為了保證彎曲桿菌的生長，通常需要在固體培養(yǎng)基中加入5%（v/v）的脫纖維裂解羊血。本實驗簡述彎曲桿菌所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件、菌株分離注意事項和菌株保存方法。
二、彎曲桿菌的培養(yǎng)
1、培養(yǎng)基的配制
1）、Camp-BAP固體培養(yǎng)基的配制：
稱取8.92g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。
2）、Skirrow固體培養(yǎng)基的配制：
稱取8.5g培養(yǎng)基，溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌，待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血，充分搖勻后倒平板。
FBP原液配置：
分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵，溶于20ml蒸餾水中，濾膜過濾除菌，放置4°C冰箱可保存一周。
3）、布氏肉湯增菌液的配制：
稱取28.1g布氏肉湯粉末，溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌，冷卻后備用。
2、增菌培養(yǎng)
將新鮮食品，如雞肉，減碎，取5g置于50ml離心管中，加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品，擰緊離心管，先在37°C下預(yù)增菌4小時，在加入100 ul頭孢哌酮（30mg/ml），并顛倒混勻，放置在微需氧培養(yǎng)箱中42°C培養(yǎng)48小時。
3、分離純化
用接種環(huán)沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上，在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發(fā)亮的菌落在Camp-BAP平板上純化，挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。
4、菌株培養(yǎng)
將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時，觀察細菌生長狀態(tài)。微需氧條件的創(chuàng)造可用微需氧產(chǎn)氣袋和密閉培養(yǎng)罐，也可以用微需氧培養(yǎng)箱（三氣培養(yǎng)箱）培養(yǎng)。
5、菌株保存方法
挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養(yǎng)基上平板劃線，放置在42°C的微需氧環(huán)境下培養(yǎng)48小時，用滅菌棉簽從平板上刮下長出的菌落，懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中，置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差，存放一周后細菌復(fù)蘇率即顯著下降。此外，保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。
三、注意事項
（1）、由于彎曲桿菌是微需氧的細菌，生長條件苛刻，存在分離率低、培養(yǎng)復(fù)雜且難以保存的問題。從食品中分離彎曲桿菌首先要保證食品的新鮮度，此外還可通過布氏肉湯增菌步驟來提高分離率。
（2）、彎曲桿菌的生長力較弱，容易受到大腸桿菌、沙門氏菌等雜菌的污染，因此微生物實驗操作過程應(yīng)保持無菌，為降低雜菌污染，也可在培養(yǎng)基中加入萬古霉素和多粘菌素B。
（3）、彎曲桿菌培養(yǎng)用的血平板應(yīng)保持新鮮。脫纖維裂解羊血在4°C條件下可保存兩周，制備好的血平板在4°C條件下最多保存一周。
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