酵母粉瓊脂培養(yǎng)基的使用方法與質量控制及應用場景！
小楊 / 2026-01-07 09:45:22
酵母粉瓊脂培養(yǎng)基是一類以酵母粉為核心營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基，主要用于微生物的分離、純化、計數和保藏，尤其適合營養(yǎng)需求較高的異養(yǎng)微生物（如酵母菌、乳酸菌、部分細菌）的培養(yǎng)。
一、培養(yǎng)基原理
核心營養(yǎng)成分及作用
成分 主要作用
酵母粉 提供豐富的蛋白質、多肽、氨基酸、核苷酸及生長因子，滿足微生物生長的營養(yǎng)需求，尤其適合營養(yǎng)缺陷型菌株或對營養(yǎng)要求苛刻的微生物
瓊脂 作為凝固劑，在 95℃左右溶解，40℃左右凝固，形成固體培養(yǎng)基基質，不參與微生物代謝
碳源（可選） 如葡萄糖、蔗糖，提供微生物生長所需的能量來源；若培養(yǎng)基用途為分離利用特定碳源的菌株，可針對性添加
氮源（輔助） 部分配方會添加蛋白胨等，強化氮源供給，提升微生物生長速度和菌落形態(tài)穩(wěn)定性
水 作為溶劑，維持微生物細胞的滲透壓和代謝環(huán)境
培養(yǎng)機制微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖，形成肉眼可見的菌落，不同微生物的菌落形態(tài)（大小、形狀、顏色、邊緣、隆起度）存在差異，可據此進行初步的形態(tài)學鑒定；同時，固體培養(yǎng)基能有效分離混雜的微生物菌群，實現單菌落的純化。
二、標準使用方法
1、培養(yǎng)基配制（以基礎配方為例：酵母粉 5g + 蛋白胨 10g + 葡萄糖 10g + 瓊脂 15~20g + 水 1000mL）
稱量：按配方準確稱取各成分，瓊脂用量可根據所需硬度調整（15g/L 為軟瓊脂，20g/L 為硬瓊脂）。
溶解：將所有成分加入蒸餾水或去離子水中，攪拌均勻后加熱煮沸，直至瓊脂完全溶解，過程中需不斷攪拌，防止糊底和溢出。
調 pH：根據培養(yǎng)菌株的需求調整 pH，多數微生物適合 pH 6.0~7.0，用 1mol/L HCl 或 NaOH 調節(jié)后，補水至原體積。
分裝：將溶解好的培養(yǎng)基分裝至三角瓶或培養(yǎng)皿中，分裝量根據容器大小確定（三角瓶不超過 2/3 體積，培養(yǎng)皿約 15~20mL /皿）。
滅菌：采用高壓蒸汽滅菌，條件為 121℃、103.4kPa、15~20min，滅菌后取出冷卻至 50~60℃（避免瓊脂凝固，同時防止溫度過高殺死待接種微生物）。
倒平板：在超凈工作臺內，將冷卻后的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿，輕輕晃動使培養(yǎng)基均勻分布，待完全凝固后倒置，標記培養(yǎng)基名稱、配制日期。
2、接種與培養(yǎng)
接種前準備：將培養(yǎng)基平板、接種工具（接種環(huán)、涂布棒）、待接種菌株置于超凈工作臺，紫外滅菌 20~30min，通風后使用。
接種方法
涂布法：取 0.1mL 菌懸液滴加在培養(yǎng)基表面，用無菌涂布棒均勻涂布，適用于微生物計數。
劃線法：用無菌接種環(huán)蘸取少量菌液或菌落，在培養(yǎng)基表面進行連續(xù)劃線，通過劃線稀釋實現單菌落分離，適用于菌株純化。
點接法：用接種環(huán)直接挑取單菌落點種在培養(yǎng)基表面，適用于菌株保藏或菌落形態(tài)觀察。
培養(yǎng)條件：根據目標微生物的生長特性設置參數，如酵母菌培養(yǎng)條件為 28℃、有氧/兼性厭氧環(huán)境，培養(yǎng) 24~48h；乳酸菌需 37℃、厭氧環(huán)境，培養(yǎng) 48~72h。
3、結果觀察與后續(xù)處理
菌落觀察：培養(yǎng)結束后，觀察菌落的形態(tài)、大小、顏色、透明度、邊緣特征等，記錄并與標準菌株對比。
純化與保藏：挑取典型單菌落，轉接至新的酵母粉瓊脂培養(yǎng)基平板，進行二次純化；純化后的菌株可接種至斜面培養(yǎng)基，4℃短期保藏，或加入甘油凍存液 - 80℃長期保藏。
三、注意事項
滅菌控制：高壓滅菌時間不宜過長，否則會導致培養(yǎng)基營養(yǎng)成分分解，影響微生物生長；若培養(yǎng)基中添加了對熱敏感的物質，需在培養(yǎng)基冷卻至 50℃左右時無菌操作加入。
無菌操作：整個配制、接種過程需嚴格遵守無菌規(guī)范，防止雜菌污染，超凈工作臺使用前需紫外滅菌，操作人員需佩戴無菌手套、口罩。
pH 調整：pH 過高或過低會抑制微生物生長，甚至導致菌株死亡，調節(jié)后需用 pH 計或精密 pH 試紙驗證。
儲存條件：未使用的培養(yǎng)基平板需倒置存放于 4℃冰箱，避光保存，保質期一般為 1~2 周，使用前需檢查是否有雜菌污染，污染的培養(yǎng)基需滅菌后丟棄。
四、質量控制
無菌性檢測：隨機抽取 10% 的培養(yǎng)基平板，37℃培養(yǎng) 24~48h，若無菌落生長，說明滅菌徹底；若出現雜菌菌落，需重新配制并滅菌。
營養(yǎng)有效性檢測：接種標準菌株（如
釀酒酵母 ATCC 9763），觀察菌落生長情況，標準菌株應生長良好，菌落形態(tài)典型，無異常形態(tài)。
批次一致性：同一批次培養(yǎng)基的配方、滅菌條件需保持一致，避免因成分或滅菌差異導致實驗結果偏差。
五、應用場景
營養(yǎng)缺陷型微生物的篩選（可通過添加或去除特定營養(yǎng)成分實現）。
微生物菌種的短期保藏。
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