葡萄球菌增菌肉湯的使用方法與注意事項及解決方案！
小楊 / 2026-01-05 09:34:45
葡萄球菌增菌肉湯是一種選擇性增菌培養(yǎng)基，利用高濃度氯化鈉抑制大多數(shù)革蘭氏陰性菌及部分革蘭氏陽性菌生長，同時為葡萄球菌（尤其是耐鹽的
金黃色葡萄球菌）提供營養(yǎng)，主要用于食品、臨床標(biāo)本、環(huán)境樣品中葡萄球菌的富集培養(yǎng)，以便后續(xù)分離鑒定。
一、使用方法
1、培養(yǎng)基制備
按培養(yǎng)基說明書稱取干粉，例如 7.5% 氯化鈉肉湯干粉，每升蒸餾水加入對應(yīng)重量的培養(yǎng)基粉末。
充分?jǐn)嚢枞芙?，避免結(jié)塊，必要時可加熱煮沸助溶（注意防止溢出）。
分裝至試管或三角瓶，121℃高壓蒸汽滅菌 15min，滅菌后冷卻至室溫備用。若出現(xiàn)渾濁、沉淀或顏色異常，需廢棄。
2、樣品接種與培養(yǎng)
液體樣品：直接取定量樣品（如 1mL 食品勻漿液、臨床膿液稀釋液）接種至肉湯中，輕輕搖勻。
固體樣品：先將樣品制成勻漿液或稀釋液，再取定量接種，確保樣品與肉湯充分混合。
置于 36±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 18~24h；若樣品中葡萄球菌含量較低，可延長培養(yǎng)至 48h。
3、后續(xù)檢測
培養(yǎng)結(jié)束后，觀察肉湯是否渾濁（
葡萄球菌增殖會導(dǎo)致肉湯變渾濁）。
取渾濁的肉湯培養(yǎng)液，劃線接種于血瓊脂平板或甘露醇氯化鈉瓊脂平板，進行分離純化。
結(jié)合菌落形態(tài)、革蘭氏染色、生化試驗（如血漿凝固酶試驗）或分子生物學(xué)方法，鑒定葡萄球菌種類。
二、注意事項
1、培養(yǎng)基配制關(guān)鍵要點
氯化鈉濃度精準(zhǔn)性：7.5% 氯化鈉是該培養(yǎng)基選擇性的核心，濃度過高會抑制葡萄球菌本身，過低則無法有效抑制雜菌。稱量時需使用分析天平，確保配比準(zhǔn)確。
pH 值控制：滅菌前培養(yǎng)基 pH 應(yīng)調(diào)至 7.2~7.4。pH 過高或過低會影響細(xì)菌生長，可使用 1mol/L HCl 或 NaOH 調(diào)節(jié)。
滅菌條件嚴(yán)格遵守：必須采用 121℃、15min 高壓滅菌，滅菌時間過長或溫度過高會破壞營養(yǎng)成分；滅菌不徹底則會滋生雜菌，干擾實驗結(jié)果。
2、樣品接種操作規(guī)范
無菌操作：全程在超凈工作臺或無菌環(huán)境中進行，接種環(huán)、移液管需滅菌，避免外源性污染。
接種量適宜：根據(jù)樣品類型調(diào)整接種量，一般液體樣品接種 1~2mL，固體樣品勻漿液接種 1mL，過量接種會導(dǎo)致雜菌負(fù)荷過高，突破培養(yǎng)基選擇性抑制。
3、培養(yǎng)過程質(zhì)控
陰性對照設(shè)置：每次實驗需設(shè)置空白對照（未接種的肉湯培養(yǎng)基），若對照出現(xiàn)渾濁，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底或操作污染，實驗結(jié)果無效。
陽性對照設(shè)置：同時接種已知的
金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株（如
ATCC 25923），若陽性對照未生長，說明培養(yǎng)基失效或培養(yǎng)條件不當(dāng)，需重新配制培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)參數(shù)。
培養(yǎng)時間把控：培養(yǎng)時間不足會導(dǎo)致葡萄球菌未充分增殖，難以檢出；超過 48h 可能滋生耐受高鹽的雜菌，干擾后續(xù)分離。
4、結(jié)果判讀與后續(xù)實驗注意事項
肉湯渾濁僅代表有耐鹽菌生長，不能直接判定為
葡萄球菌，必須通過平板分離和生化鑒定確認(rèn)，避免將耐鹽的芽孢桿菌等誤判。
若接種后肉湯始終清亮，可能是樣品中無葡萄球菌，或培養(yǎng)條件不適宜，可重復(fù)實驗并適當(dāng)調(diào)整樣品稀釋度。
5、儲存與安全
未滅菌的培養(yǎng)基干粉需密封儲存于陰涼干燥處，避免受潮；滅菌后的肉湯培養(yǎng)基建議在 2~8℃冷藏，且1 周內(nèi)使用完畢，超過保質(zhì)期會導(dǎo)致營養(yǎng)成分降解。
操作過程中需佩戴手套、口罩，避免接觸臨床標(biāo)本或污染樣品，實驗廢棄物需經(jīng)高壓滅菌后處理。
三、常見失誤與解決方案
常見失誤 后果 解決方案
氯化鈉稱量不足 雜菌大量生長，掩蓋葡萄球菌 重新精準(zhǔn)稱量，配制培養(yǎng)基時復(fù)核濃度
滅菌溫度過高/時間過長 培養(yǎng)基營養(yǎng)破壞，葡萄球菌不生長 嚴(yán)格遵守 121℃、15min 滅菌條件，滅菌后觀察培養(yǎng)基狀態(tài)
未設(shè)置對照實驗 無法判斷污染或培養(yǎng)基失效 每次實驗必須設(shè)置陽性、陰性對照
培養(yǎng)時間過短 葡萄球菌增殖不足，漏檢 延長培養(yǎng)至 24~48h，觀察肉湯渾濁情況
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