微生物純種培養(yǎng)的核心方法之劃線、涂布及傾注分離法！
小楊 / 2025-12-23 10:42:56
百歐博偉生物：微生物純種培養(yǎng)的核心是通過物理或化學(xué)手段分離單菌落，主要方法可分為固體培養(yǎng)基分離法、液體培養(yǎng)基分離法和選擇性培養(yǎng)法三大類，其中固體培養(yǎng)基分離法是最基礎(chǔ)、最常用的手段。
一、固體培養(yǎng)基分離法（核心方法）
利用固體培養(yǎng)基（添加瓊脂）的凝固性，使微生物在表面或內(nèi)部生長形成單菌落，從而實(shí)現(xiàn)分離純化。
1、劃線分離法
操作原理：用無菌接種環(huán)蘸取少量菌液，在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線。隨著劃線次數(shù)增加，菌液濃度逐漸降低，最終在劃線末端形成單菌落。
特點(diǎn)：操作簡單、快速，無需對菌液進(jìn)行稀釋，適合菌液濃度較高的樣品。
適用場景：初步分離土壤、水、食品等樣品中的微生物，快速獲得單菌落。
2、涂布分離法
操作原理：先將樣品進(jìn)行梯度稀釋，取一定量稀釋后的菌液均勻涂布在固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)后形成單菌落。
特點(diǎn)：可通過稀釋倍數(shù)估算樣品中的微生物數(shù)量（菌落計(jì)數(shù)），單菌落分布更均勻。
適用場景：需要定量分析微生物數(shù)量的實(shí)驗(yàn)，如食品衛(wèi)生檢測、環(huán)境微生物計(jì)數(shù)。
3、傾注分離法
操作原理：將稀釋后的菌液與融化并冷卻至 45-50℃的固體培養(yǎng)基混合，倒入培養(yǎng)皿中凝固，微生物在培養(yǎng)基內(nèi)部或表面生長形成單菌落。
特點(diǎn)：可分離兼性厭氧或厭氧微生物，但操作時(shí)需控制培養(yǎng)基溫度，避免燙傷菌種。
適用場景：分離土壤中兼性厭氧的細(xì)菌或真菌，以及某些對氧氣敏感的微生物。
二、液體培養(yǎng)基分離法
通過液體培養(yǎng)基的選擇性培養(yǎng)或稀釋，逐步淘汰雜菌，獲得純種微生物，較少單獨(dú)使用，多作為輔助手段。
1、稀釋培養(yǎng)法（富集培養(yǎng)）
操作原理：將樣品進(jìn)行梯度稀釋，取不同稀釋度的菌液接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。選擇菌液澄清后變渾濁的最高稀釋度，可初步獲得優(yōu)勢純種。
特點(diǎn)：依賴目標(biāo)微生物的生長優(yōu)勢，可富集低濃度的目標(biāo)菌種，但無法直接獲得單菌落，需后續(xù)結(jié)合固體培養(yǎng)基純化。
適用場景：從含菌量極低的樣品（如深海海水、極端環(huán)境土壤）中富集目標(biāo)微生物。
2、單細(xì)胞分離法
操作原理：利用顯微鏡觀察，通過顯微操作儀直接挑取單個(gè)微生物細(xì)胞，接種到新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
特點(diǎn)：可直接獲得單細(xì)胞起源的純種，純度極高，但操作難度大，對儀器和技術(shù)要求高。
適用場景：珍貴菌種的純化、微生物突變株的篩選，或需要明確菌種起源的科研實(shí)驗(yàn)。
三、選擇性培養(yǎng)法（輔助分離手段）
通過調(diào)整培養(yǎng)基成分或培養(yǎng)條件，抑制雜菌生長，促進(jìn)目標(biāo)微生物繁殖，提升分離效率。
1、選擇性培養(yǎng)基法
操作原理：在培養(yǎng)基中添加特定物質(zhì)（如高鹽、特定碳源）。例如，高鹽培養(yǎng)基可抑制大多數(shù)細(xì)菌生長，僅允許
金黃色葡萄球菌生長。
特點(diǎn)：針對性強(qiáng)，可快速從復(fù)雜樣品中分離目標(biāo)微生物，常與固體培養(yǎng)基分離法結(jié)合使用。
適用場景：從人體分泌物中分離致病菌（如從糞便中分離
大腸桿菌）、從污染土壤中分離特定降解菌。
2、物理?xiàng)l件控制法
操作原理：通過控制培養(yǎng)溫度、氧氣濃度、pH 值等條件，篩選目標(biāo)微生物。例如，厭氧培養(yǎng)箱可分離厭氧微生物，4℃低溫培養(yǎng)可篩選低溫菌。
特點(diǎn)：利用微生物的生理特性進(jìn)行分離，無需添加化學(xué)試劑，對菌種無毒性影響。
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