甘露醇卵黃培養(yǎng)基的原理和使用方法及常見問題與解決方案！
小楊 / 2025-12-12 10:11:19
甘露醇卵黃培養(yǎng)基（Mannitol Egg Yolk Medium，MEYM）是微生物學(xué)中常用的選擇性鑒別培養(yǎng)基，核心用于分離、鑒別革蘭氏陽性球菌，尤其適用于食品、臨床樣本中致病性葡萄球菌（如
金黃色葡萄球菌）的檢測。以下從基礎(chǔ)原理、配方組成、使用方法、結(jié)果判讀、注意事項(xiàng)等方面進(jìn)行系統(tǒng)解析，兼顧理論與實(shí)操性：
一、基礎(chǔ)原理（選擇性 + 鑒別性雙重機(jī)制）
MEYM 的設(shè)計(jì)基于微生物的代謝特性和生理差異，通過“選擇性抑制”和“代謝產(chǎn)物顯色”實(shí)現(xiàn)目標(biāo)菌的分離與鑒定：
1、選擇性機(jī)制：抑制雜菌生長
部分配方會(huì)添加亞碲酸鉀（K?TeO??3H?O）：進(jìn)一步抑制非葡萄球菌的雜菌，同時(shí)與葡萄球菌產(chǎn)生的硫化氫（H?S）反應(yīng)生成黑色沉淀，輔助鑒別。
2、鑒別機(jī)制：區(qū)分致病性與非致病性葡萄球菌
核心碳源：甘露醇（D - 甘露醇）：致病性葡萄球菌（如
金黃色葡萄球菌）可產(chǎn)生甘露醇脫氫酶，將甘露醇發(fā)酵生成乳酸等酸性產(chǎn)物，導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 下降。
指示劑：酚紅（pH 指示劑）：酸性條件下（pH<6.8）酚紅由紅色變?yōu)辄S色，因此致病性葡萄球菌菌落周圍會(huì)出現(xiàn)黃色透明環(huán)；非致病性葡萄球菌（如
表皮葡萄球菌）不發(fā)酵甘露醇，菌落周圍無黃色環(huán)，培養(yǎng)基仍為紅色。
卵黃的作用：卵黃中含有卵磷脂，葡萄球菌產(chǎn)生的卵磷脂酶可分解卵磷脂，形成不透明的乳白色沉淀環(huán)（環(huán)繞菌落），進(jìn)一步確認(rèn)葡萄球菌屬（其他菌多不產(chǎn)生卵磷脂酶）。
二、典型配方組成（每 1000mL）
成分 含量 作用
胰蛋白胨 10g 提供氮源、氨基酸和生長因子
牛肉膏 5g 提供碳源、維生素和生長因子
D - 甘露醇 10g 鑒別用碳源（發(fā)酵產(chǎn)酸）
NaCl 75g 高滲透壓，選擇性抑制雜菌
酚紅 0.025g pH 指示劑（紅→黃）
卵黃液 100mL 提供卵磷脂（鑒別卵磷脂酶）、脂質(zhì)和營養(yǎng)
瓊脂 15-20g 凝固劑
蒸餾水 900mL 溶劑
注：卵黃液需新鮮制備（無菌操作分離卵黃，避免蛋清污染），或使用商品化無菌卵黃懸液。
三、使用方法（完整操作流程）
1、培養(yǎng)基制備
溶解基礎(chǔ)成分：稱取胰蛋白胨、牛肉膏、甘露醇、NaCl、酚紅、瓊脂，加入 900mL 蒸餾水，加熱煮沸至完全溶解（攪拌避免瓊脂結(jié)塊）。
調(diào)節(jié) pH：冷卻至 40-50℃，用 1mol/L HCl 或 NaOH 調(diào)節(jié) pH 至 7.4-7.6（酚紅此時(shí)為紅色）。
滅菌：121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘（避免甘露醇長時(shí)間高溫分解），滅菌后迅速取出，置于 50-55℃水浴鍋中保溫（防止瓊脂凝固）。
添加卵黃液：在無菌條件下，緩慢加入 100mL 無菌卵黃液（或商品化卵黃懸液），輕輕搖勻（避免產(chǎn)生氣泡），若添加亞碲酸鉀溶液，需同時(shí)加入并混勻。
倒平板：將混合好的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿（每皿約 20mL），水平放置冷卻凝固（室溫靜置 30 分鐘或 4℃冷藏 1 小時(shí)），備用。
2、樣本接種與培養(yǎng)
樣本處理：
固體樣本（如食品、糞便）：稱取 25g 樣本，加入 225mL 無菌生理鹽水，均質(zhì)器打碎制成 1:10 稀釋液，進(jìn)一步梯度稀釋（如 10?²、10?³）。
液體樣本（如尿液、血清）：直接梯度稀釋或取 0.1mL 原液接種。
接種方法：采用涂布平板法（推薦）：取 0.1mL 稀釋后的樣本，滴加在 MEYM 平板表面，用無菌 L 型玻璃刮棒均勻涂布，每個(gè)稀釋度做 3 個(gè)平行平板。
培養(yǎng)條件：將平板倒置（避免冷凝水滴落污染菌落），37℃恒溫培養(yǎng) 18-24 小時(shí)（若需觀察卵磷脂酶沉淀，可延長至 48 小時(shí)）。
3、結(jié)果判讀
培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)、顏色及周圍培養(yǎng)基變化，典型結(jié)果如下：
微生物類型 菌落特征 周圍培養(yǎng)基/沉淀環(huán)情況
金黃色葡萄球菌（致病性） 圓形、凸起、光滑、濕潤，直徑 2-3mm，呈金黃色 黃色透明環(huán)（甘露醇發(fā)酵產(chǎn)酸）+ 乳白色沉淀環(huán)（卵磷脂酶）
表皮葡萄球菌（非致病性） 圓形、凸起、光滑，直徑 1-2mm，呈白色或淡黃色 無黃色環(huán)（不發(fā)酵甘露醇）+ 乳白色沉淀環(huán)（卵磷脂酶）
雜菌（如大腸桿菌） 多數(shù)不生長（高滲抑制），少數(shù)生長者菌落細(xì)小 無黃色環(huán)，無乳白色沉淀環(huán)，培養(yǎng)基仍為紅色
注：若添加亞碲酸鉀，
金黃色葡萄球菌菌落會(huì)因還原亞碲酸鉀生成黑色沉淀，呈“黑色菌落 + 黃色環(huán) + 乳白色沉淀環(huán)”，鑒別更準(zhǔn)確。
四、關(guān)鍵注意事項(xiàng)（避免實(shí)驗(yàn)誤差）
1、卵黃液的處理：
卵黃液必須無菌，制備時(shí)需用 75% 酒精消毒雞蛋外殼，無菌操作分離卵黃（避免蛋清混入，蛋清會(huì)抑制部分葡萄球菌生長）。
卵黃液需在培養(yǎng)基滅菌后冷卻至 50-55℃時(shí)加入（溫度過高會(huì)破壞卵黃中的卵磷脂，溫度過低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固）。
2、高滲環(huán)境的影響：
NaCl 濃度需準(zhǔn)確（7.5%），濃度過高會(huì)抑制葡萄球菌本身生長，濃度過低則無法抑制雜菌。
培養(yǎng)基滅菌后避免反復(fù)加熱（高滲條件下反復(fù)加熱會(huì)導(dǎo)致瓊脂凝固不良）。
3、培養(yǎng)時(shí)間的控制：
18-24 小時(shí)為最佳判讀時(shí)間，超過 48 小時(shí)可能因雜菌少量生長（耐高滲突變株）或葡萄球菌過度發(fā)酵導(dǎo)致黃色環(huán)擴(kuò)散，影響結(jié)果判斷。
4、樣本稀釋的重要性：
若樣本中葡萄球菌濃度較高，需充分梯度稀釋（如 10?³~10??），避免菌落密集重疊，無法觀察單個(gè)菌落的黃色環(huán)和沉淀環(huán)。
5、結(jié)果驗(yàn)證：
典型菌落需進(jìn)一步鑒定（如革蘭氏染色、血漿凝固酶試驗(yàn)）：
金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌（葡萄狀排列），血漿凝固酶陽性；
表皮葡萄球菌血漿凝固酶陰性，避免誤判。
五、應(yīng)用領(lǐng)域
食品微生物檢測：檢測肉類、乳制品、糕點(diǎn)等食品中的致病性金黃色葡萄球菌（食源性致病菌，可產(chǎn)生腸毒素導(dǎo)致食物中毒）。
臨床樣本檢測：分離鑒定血液、尿液、傷口分泌物等樣本中的葡萄球菌，輔助診斷敗血癥、尿路感染、皮膚感染等疾病。
環(huán)境微生物監(jiān)測：檢測手術(shù)室、食品加工車間等環(huán)境中的金黃色葡萄球菌，評估衛(wèi)生狀況。
六、常見問題與解決方案
常見問題 原因分析 解決方案
平板上雜菌生長過多 NaCl 濃度不足，或樣本處理時(shí)污染 嚴(yán)格控制 NaCl 濃度（7.5%），樣本處理全程無菌操作
無黃色環(huán)但菌落有乳白色沉淀 非致病性葡萄球菌（如
表皮葡萄球菌），或甘露醇分解不完全 延長培養(yǎng)至 48 小時(shí)，或進(jìn)一步做血漿凝固酶試驗(yàn)
菌落周圍無乳白色沉淀環(huán) 卵黃液失效（卵磷脂被破壞），或菌株無卵磷脂酶 更換新鮮卵黃液，或確認(rèn)菌株是否為葡萄球菌（革蘭氏染色）
培養(yǎng)基滅菌后顏色變淺 甘露醇高溫分解產(chǎn)酸，導(dǎo)致酚紅變黃 縮短滅菌時(shí)間（121℃，15 分鐘），滅菌后迅速冷卻
葡萄球菌生長緩慢或不生長 卵黃液添加過多（抑制生長），或 NaCl 濃度過高 卵黃液用量控制在 10%（V/V），核對 NaCl 用量
總結(jié)
甘露醇卵黃培養(yǎng)基通過“高滲選擇性 + 雙代謝鑒別（甘露醇發(fā)酵 + 卵磷脂酶）”，實(shí)現(xiàn)了葡萄球菌屬的分離與致病性篩選，操作簡便、結(jié)果直觀，是微生物檢測領(lǐng)域的經(jīng)典培養(yǎng)基。核心在于嚴(yán)格控制配方比例、無菌操作及培養(yǎng)條件，結(jié)合后續(xù)生化鑒定可精準(zhǔn)區(qū)分
金黃色葡萄球菌與非致病性葡萄球菌，為食品安全和臨床診斷提供可靠依據(jù)。
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