煮沸滅菌過(guò)程中如何避免培養(yǎng)基被污染？具體措施有哪些？
小楊 / 2025-11-22 13:50:36
百歐博偉生物：煮沸滅菌由于溫度僅為 100℃，滅菌效果有限，且過(guò)程中易因操作不當(dāng)導(dǎo)致污染，需通過(guò)嚴(yán)格控制細(xì)節(jié)減少污染風(fēng)險(xiǎn)，具體措施如下：
一、滅菌前：徹底清潔與預(yù)處理
1、容器與工具的無(wú)菌化處理
所有接觸培養(yǎng)基的容器（燒杯、錐形瓶等）、工具（玻璃棒、移液管）需先用洗潔精徹底清洗，去除殘留雜質(zhì)，再用純化水沖洗 3 次以上。
清洗后，將容器、工具放入沸水中煮沸 10 分鐘（初步滅菌），或用干熱滅菌（160℃，2 小時(shí)），確保表面無(wú)雜菌殘留。
2、培養(yǎng)基溶解時(shí)的防污染
溶解干粉培養(yǎng)基時(shí)，在潔凈環(huán)境中操作（如擦拭后的實(shí)驗(yàn)臺(tái)），避免空氣中的塵埃、雜菌落入溶液。
溶解過(guò)程中如需攪拌，玻璃棒需提前滅菌，且攪拌時(shí)避免觸碰容器外壁或臺(tái)面。
二、滅菌中：嚴(yán)格控制煮沸與密封狀態(tài)
1、容器密封的有效性
分裝培養(yǎng)基時(shí)，容器口需預(yù)留 3~5cm 空間，避免煮沸時(shí)溢出導(dǎo)致污染。
用滅菌棉塞（提前 121℃高壓滅菌 30 分鐘）塞緊容器口，棉塞長(zhǎng)度的 2/3 需塞入瓶口（過(guò)松易脫落，過(guò)緊影響透氣），外部用雙層牛皮紙緊密包裹并扎緊（防止蒸汽直接浸濕棉塞，導(dǎo)致雜菌附著）。
若使用硅膠塞，需確保塞子與瓶口貼合緊密，且提前用 75% 酒精擦拭消毒。
2、煮沸過(guò)程的防污染操作
若采用“水浴煮沸”（容器置于水中），需保證鍋中水位始終低于容器內(nèi)培養(yǎng)基液面，防止外界水進(jìn)入容器污染培養(yǎng)基。
煮沸時(shí)保持小火持續(xù)沸騰，避免劇烈沸騰導(dǎo)致培養(yǎng)基沖出棉塞或牛皮紙，若產(chǎn)生大量泡沫，可輕輕攪拌或短暫關(guān)火降溫。
中途需補(bǔ)充鍋中水分時(shí)，應(yīng)加入沸水（而非冷水），避免溫度驟降導(dǎo)致容器內(nèi)外氣壓差，吸入外界空氣雜菌。
3、避免交叉污染
多個(gè)容器同時(shí)滅菌時(shí)，需保持間距，避免相互擠壓導(dǎo)致棉塞脫落或容器破裂。
若有培養(yǎng)基溢出，需立即關(guān)火，更換污染的容器和棉塞，并用 75% 酒精擦拭周邊區(qū)域。
三、滅菌后：無(wú)菌操作與儲(chǔ)存
1、滅菌后轉(zhuǎn)移的無(wú)菌保護(hù)
煮沸結(jié)束后，待容器稍冷卻（約 5~10 分鐘，避免燙手），立即轉(zhuǎn)移至超凈臺(tái)或無(wú)菌操作間，避免在開(kāi)放環(huán)境中長(zhǎng)時(shí)間放置（空氣中的雜菌可能通過(guò)潮濕的棉塞進(jìn)入）。
轉(zhuǎn)移過(guò)程中，避免觸碰容器口及棉塞，若棉塞不慎掉落，需重新更換滅菌棉塞并再次煮沸 30 分鐘。
2、分裝與凝固的無(wú)菌控制
若需倒平板，待培養(yǎng)基冷卻至 50~60℃（手感微燙但不燙手）時(shí)，在超凈臺(tái)中操作：打開(kāi)容器時(shí)，瓶口對(duì)著酒精燈火焰消毒 3~5 秒，倒平板動(dòng)作迅速，避免瓶口長(zhǎng)時(shí)間暴露。
平板凝固后，立即倒置（防止冷凝水滴落污染表面），標(biāo)記后置于 4℃冰箱暫存，儲(chǔ)存時(shí)間不超過(guò) 1 周（煮沸滅菌的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)易流失，且無(wú)菌性難以長(zhǎng)期維持）。
四、關(guān)鍵原則總結(jié)
煮沸滅菌的核心是減少“滅菌后 - 使用前”的污染機(jī)會(huì)，因?yàn)槠浔旧頍o(wú)法殺滅芽孢，若操作中引入雜菌，極易導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。因此，需全程保持“清潔 - 密封 - 無(wú)菌轉(zhuǎn)移”的連貫控制，且僅用于對(duì)無(wú)菌要求極低的場(chǎng)景，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)建議優(yōu)先采用高壓蒸汽滅菌。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對(duì)微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究。對(duì)我國(guó)生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對(duì)社會(huì)乃至國(guó)外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù)。
除此之外，我們還擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購(gòu)買(mǎi)項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國(guó)內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長(zhǎng)期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：微生物菌種退化與復(fù)壯的原因、檢測(cè)與復(fù)壯方法及預(yù)防措施！
下一篇：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的核心原理與操作步驟及常見(jiàn)問(wèn)題與解決！