血瓊脂培養(yǎng)基的選用與平板制作指南及常見問題與解決！
小楊 / 2025-05-22 09:52:45
血瓊脂培養(yǎng)基是一種常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基，廣泛應(yīng)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室中苛養(yǎng)菌（如
鏈球菌、
肺炎球菌等）的分離培養(yǎng)及溶血特性觀察。以下是其選用和平板制作的注意事項(xiàng)：
一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選用
1、常用基礎(chǔ)類型
營養(yǎng)瓊脂（Nutrient Agar）：通用型基礎(chǔ)，適合大多數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)，但營養(yǎng)相對簡單。
哥倫比亞瓊脂（Columbia Agar）：含更多營養(yǎng)成分（如酵母提取物、酪蛋白水解物），適合苛養(yǎng)菌（如厭氧菌或鏈球菌）。
腦心浸液瓊脂（BHI Agar）：營養(yǎng)豐富，適合對營養(yǎng)要求高的細(xì)菌（如
肺炎鏈球菌）。
2、選擇依據(jù)
目標(biāo)菌種：苛養(yǎng)菌需選擇營養(yǎng)更豐富的基底（如
哥倫比亞瓊脂）。
檢測目的：若需觀察溶血現(xiàn)象，需選擇透明度高的基礎(chǔ)（如
胰蛋白胨大豆瓊脂）。
添加劑需求：某些菌（如
嗜血桿菌）需額外添加NAD（輔酶Ⅰ）或血紅素。
二、血源的選用
1、血源類型
脫纖維羊血：最常用，β-溶血反應(yīng)清晰（如A群鏈球菌）。
兔血或馬血：某些菌（如
副溶血弧菌）可能需要特定血源。
人血：避免使用（可能存在抗體或病原體污染）。
2、濃度
通常添加5%~10%（v/v）的血液，常用5%。
高濃度（如10%）可能抑制某些細(xì)菌（如
流感嗜血桿菌）。
三、平板制作注意事項(xiàng)
1、無菌操作
基礎(chǔ)培養(yǎng)基需高壓滅菌（121℃, 15分鐘），避免直接高溫加熱已加血的培養(yǎng)基。
血液需無菌采集，添加時保持無菌環(huán)境。
2、溫度控制
基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至45~50℃時加入血液，溫度過高會導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂（假性溶血），過低易凝固。
混合時輕柔旋轉(zhuǎn)混勻，避免振蕩產(chǎn)生氣泡或溶血。
3、倒板與保存
厚度：3~4 mm（約20~25 mL/90 mm平板），過薄易干燥，過厚影響氧氣滲透。
避免氣泡：傾倒后輕晃平板使表面平整，或火焰短暫灼燒表面去除氣泡。
保存：現(xiàn)配現(xiàn)用，或密封后2~8℃保存≤1周（長時間冷藏可能導(dǎo)致血液成分降解）。
4、質(zhì)量控制
觀察是否有溶血、污染或異常沉淀。
四、特殊要求
1、厭氧菌培養(yǎng)
需預(yù)還原處理或在厭氧環(huán)境中制備。
2、選擇性培養(yǎng)基
若需抑制雜菌，可添加抗生素（如萬古霉素）或染料（如結(jié)晶紫）。
3、CO?培養(yǎng)
某些細(xì)菌（如
肺炎鏈球菌）需5%~10% CO?環(huán)境，可選用含碳酸氫鈉的緩沖系統(tǒng)。
五、常見問題與解決
溶血不清晰：檢查血源是否失效、溫度是否過高，或基礎(chǔ)培養(yǎng)基透明度不足。
污染：嚴(yán)格無菌操作，確保血源和基礎(chǔ)培養(yǎng)基無菌。
干裂或冷凝水過多：倒板后充分凝固，避免疊放或溫度驟變。
通過合理選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基、嚴(yán)格操作流程和質(zhì)量控制，可確保血瓊脂平板的穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)基倒平皿后出現(xiàn)冷凝水的原因分析及解決方法！
下一篇：ATCC細(xì)胞的冷凍保存及解凍復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)操作流程！