瓊脂包埋法的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)流程與注意事項(xiàng)及應(yīng)用場景！
小楊 / 2025-03-28 09:38:51
瓊脂包埋法是一種常用于組織學(xué)和生物學(xué)研究的樣本制備技術(shù)，主要用于固定和保存組織樣本，便于后續(xù)切片和顯微觀察。以下是瓊脂包埋法的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)流程：
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1、試劑與材料
瓊脂糖（常用濃度為2%-4%）
固定液（如4%多聚甲醛、10%中性福爾馬林）
脫水劑（梯度乙醇：50%、70%、85%、95%、100%）
透明劑（二甲苯或甲苯）
包埋模具、鑷子、切片刀、載玻片等工具
2、儀器設(shè)備
水浴鍋或恒溫加熱器（用于融化瓊脂）
切片機(jī)（振動切片機(jī)或普通切片機(jī)）
顯微鏡
二、技術(shù)流程步驟
1、樣本固定
目的：保持組織形態(tài)，防止腐敗或變形。
方法：
將新鮮組織迅速浸入固定液中（如4%多聚甲醛），4℃固定24-48小時(shí)。
固定后，用磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗3次，每次15分鐘，去除殘留固定液。
2、脫水與透明
脫水：
將組織依次浸入梯度乙醇（50%→70%→85%→95%→100%），每級30分鐘至1小時(shí)，徹底去除水分。
透明：
脫水后轉(zhuǎn)入透明劑（二甲苯）中浸泡1-2小時(shí)，使組織透明化，便于后續(xù)浸蠟或瓊脂滲透。
3、瓊脂包埋
瓊脂糖溶液制備：
稱取適量瓊脂糖，加入蒸餾水或緩沖液（如PBS），加熱至60-70℃使其完全溶解（濃度通常為2%-4%，根據(jù)樣本硬度調(diào)整）。
包埋操作：
將透明后的組織放入包埋模具中，調(diào)整至所需方向（如橫切面或縱切面）。
緩慢倒入融化的瓊脂糖溶液，覆蓋組織并避免氣泡（可用鑷子輕壓組織使其完全浸沒）。
室溫或4℃靜置冷卻，待瓊脂完全凝固成膠塊（約30分鐘至1小時(shí)）。
4、修塊與切片
修整瓊脂塊：
用刀片將瓊脂塊修成梯形或方形，暴露組織切面，便于切片機(jī)夾持。
切片：
使用振動切片機(jī)（Vibratome）或普通切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度通常為20-100 μm（根據(jù)研究需求調(diào)整）。
將切片漂浮于水或緩沖液中，避免干燥。
5、后續(xù)處理（可選）
染色：
切片可進(jìn)行組織化學(xué)染色（如HE染色、尼氏染色）或免疫組化染色。
封片：
滴加封片劑（如中性樹膠），蓋上蓋玻片，避光保存。
三、注意事項(xiàng)
1、溫度控制：
融化瓊脂時(shí)避免過熱（＞80℃），防止組織損傷或瓊脂變性。
2、氣泡處理：
包埋時(shí)需緩慢倒入瓊脂，并用細(xì)針挑破氣泡，避免影響切片質(zhì)量。
3、濃度選擇：
硬組織（如植物根莖）需較高濃度瓊脂（4%），柔軟組織（如腦組織）可用2%-3%。
4、樣本大?。?/strong>
組織厚度不宜超過5 mm，否則瓊脂滲透不完全，導(dǎo)致切片碎裂。
四、應(yīng)用場景
適用于軟組織的定向切片（如腦組織、胚胎）。
常用于熒光標(biāo)記、原位雜交等需保持活性的實(shí)驗(yàn)。
與石蠟包埋相比，瓊脂包埋無需高溫脫水和浸蠟，更適用于熱敏感樣本。
通過以上流程，瓊脂包埋法能夠有效保存組織形態(tài)，為后續(xù)顯微觀察或分子實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量樣本。
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