反硝化細(xì)菌的培養(yǎng)方法！
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-09-26 15:11:11
一、反硝化細(xì)菌富集培養(yǎng)
（1）培養(yǎng)基成分及其制備：
KNO3 2克
檸檬酸鈉5 克
K2HPO4 1 克
KH2PO4 1 克
MgSO4·7H2O 0.2 克
陳海水（或蒸餾水）1000 毫升
將上面成分溶解于水，調(diào)pH 為7.2-7.6，分裝于試管或燒瓶．于121 ℃ 蒸汽下滅菌20 分鐘。
（2）接種與結(jié)果觀察：在裝富集培養(yǎng)液的試管中分別加少量的海泥或池泥．河泥，在20℃ 或25-30℃ 下培養(yǎng)5-15 天或3-10天。若培養(yǎng)液變混濁，有氣泡產(chǎn)生，說明有反硝化菌生長(zhǎng)，或檢驗(yàn)其有無氨和亞硝酸產(chǎn)生，則可判定是否有反硝化細(xì)菌生長(zhǎng)．
二、反硝化細(xì)菌分離培養(yǎng)
（1）分離培養(yǎng)基成分及制備．
葡萄糖1克
酒石酸鉀鈉10 克
KNO3 2 克
K2HPO4 0.2克
CaCl·2H2O 0.5 克
陳海水或蒸餾水1000毫升
將上述鹽類溶于水中，調(diào)pH 為7.4-7.6，裝于燒瓶中，121℃ 蒸汽下滅菌20 分鐘．
（2）接種與結(jié)果觀察：
① 將上述培養(yǎng)液傾入硅酸膠平板上，于50 ℃ 下烘烤至表面無水流動(dòng)，不宜過干，以免破裂．
② 用富集培養(yǎng)物涂布接種于烘烤后的平板培養(yǎng)基上。
③ 于適溫厭氧條件下培養(yǎng)至長(zhǎng)出足夠大的菌落．
④ 觀察菌落形態(tài)，作革蘭氏染色，油鏡下觀察其反應(yīng)及菌體形態(tài)．
⑤ 挑取菌落于液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，檢驗(yàn)其培養(yǎng)基中有無硝酸鹽（用二苯胺試劑檢驗(yàn)）和亞硝酸鹽（用鋅-碘-淀粉或格里斯試劑檢查，見硝化細(xì)菌的富集與分離）存在，若硝酸根或亞硝酸根消失，可確定所分離細(xì)菌屬反硝化細(xì)菌．
反硝化細(xì)菌的種類很多。它們主要屬于革蘭氏染色負(fù)反應(yīng)，不生芽孢的桿菌，并都屬兼、嫌氣性細(xì)菌，在通氣不良的情況下，可完全利用硝酸鹽或亞硝酸鹽中的氧來氧化所需的有機(jī)物。即對(duì)硝酸鹽和亞硝酸鹽起反硝化作用也就是對(duì)它們起還原作用。