ATCC菌種雙歧桿菌Bifidobacterium的分離和生物學(xué)性質(zhì)
中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng) / 2018-09-13 09:38:15
雙歧桿菌是一個(gè)細(xì)菌屬名。雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）是一種革蘭氏陽(yáng)性、不運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞呈桿狀、一端有時(shí)呈分叉狀、嚴(yán)格厭氧的細(xì)菌屬，廣泛存在于人和動(dòng)物的消化道、陰道和口腔等生境中。雙歧桿菌屬的細(xì)菌是人和動(dòng)物腸道菌群的重要組成成員之一。一些雙歧桿菌的菌株可以作為益生菌而用在食品、醫(yī)藥和飼料方面。
雙歧桿菌滾管分離法
1）滾管
將無氧無菌的瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中溶化，置46-50℃恒溫的水浴中，待用，用無菌注射器吸取10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度各0 .1mL，分別注入待用的試管中，然后將其平放于盛有冰水的瓷盤中迅速滾動(dòng)，帶菌的溶化瓊脂在試管內(nèi)壁會(huì)即刻形成凝固層。
2）分離
生成的菌落需挑取出來，鏡檢其形態(tài)及純度。如尚未獲得純培養(yǎng)物，需再次稀釋滾管，并再次挑取菌落，直至獲得純培養(yǎng)物為止。待挑取的單菌落預(yù)先在放大鏡下觀察確定，做好標(biāo)記。然后將培養(yǎng)基試管固定于適當(dāng)?shù)闹Ъ苌?，打開試管膠塞，同時(shí)迅速將氣流適當(dāng)、火焰滅過菌的氮?dú)忾L(zhǎng)針頭插入管內(nèi)。同時(shí)，另一液體厭氧管去掉膠塞插入另一滅過菌的通氣針頭。將準(zhǔn)備好的彎頭毛細(xì)管小心插入固體培養(yǎng)基內(nèi)，找準(zhǔn)待挑菌落，輕輕吸取，轉(zhuǎn)移至液體試管內(nèi)，加塞。37℃培養(yǎng)。培養(yǎng)24h或待培養(yǎng)液混濁后檢查已分離培養(yǎng)物的純度。 ATCC菌種
3）稀釋
在無菌條件下，用無菌注射器吸取1mL混合均勻的液體樣品，加入裝有預(yù)還原生理鹽水的厭氧試管中，用震蕩器將其混合均勻，制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1mL10-1稀釋液至另一裝有9mL生理鹽水的厭氧試管中，制成10-2稀釋液。依此進(jìn)行10倍系列稀釋，至10-7，制成不同樣品稀釋液。通常選10-5、10-6、10-7三個(gè)稀釋度進(jìn)行滾管計(jì)數(shù)。
雙歧桿菌生物學(xué)性質(zhì)
雙歧桿菌革蘭氏染色陽(yáng)性，細(xì)胞形態(tài)多樣，包括短桿狀、近球狀、長(zhǎng)彎桿狀、分叉桿狀、棍棒狀或匙狀。細(xì)胞單個(gè)或排列成V形、柵欄狀、星狀。不抗酸、不形成芽孢，不運(yùn)動(dòng)。專性厭氧。菌落較小、光滑、凸圓、邊緣完整，呈乳脂色至白色。最適生長(zhǎng)溫度為37-41℃，最低生長(zhǎng)溫度為25-28℃，最高為43-45℃。初始生長(zhǎng)最適pH為6.5-7.0，生長(zhǎng)pH范圍一般為 4.5-8.5。糖代謝經(jīng)獨(dú)特異型乳酸發(fā)酵的雙歧桿菌途徑進(jìn)行，特點(diǎn)是利用葡萄糖產(chǎn)乙酸和乳酸（摩爾比3：2），不產(chǎn)生二氧化碳，其中果糖-6-磷酸鹽磷酸轉(zhuǎn)酮酶是關(guān)鍵酶，在分類鑒定中，可用以區(qū)分與雙歧桿菌近似的幾個(gè)屬。過氧化氫酶陰性(少數(shù)例外)；不還原硝酸鹽。氮源通常為銨鹽，少數(shù)為有機(jī)氮。對(duì)氯霉素、林肯霉素、四環(huán)素、青霉素、萬(wàn)古霉素、紅霉素和桿菌肽等抗生素敏感，對(duì)多粘菌素B、卡那霉素、慶大霉素、鏈霉素和新霉素不敏感。G + C mol%值為55-67。模式種是兩歧雙歧桿菌（Bifidobacteriumbifidus）。兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌（B. adolescentis）、嬰兒雙歧桿菌（B. infantis）、長(zhǎng)雙歧桿菌（B. longum）和短雙歧桿菌（B. breve）是人體腸道中常見的雙歧桿菌。
雙歧桿菌在人體腸內(nèi)發(fā)酵后可產(chǎn)生乳酸和醋酸，能提高機(jī)體對(duì)礦質(zhì)元素如鈣、鐵的利用率，促進(jìn)鐵和維生素D的吸收。雙歧桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)生半乳糖，是構(gòu)成腦神經(jīng)系統(tǒng)中腦苷脂的成分，與嬰兒出生后腦的迅速生長(zhǎng)有密切關(guān)系。雙歧桿菌可以產(chǎn)生維生素B1、B2、B6、B12及丙氨酸、纈氨酸、天冬氨酸和蘇氨酸等人體必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)于人體具有重要的營(yíng)養(yǎng)作用。