新版藥典修改或新增了微生物菌種管理、菌種檢定、菌種鑒定、菌株分型、菌株溯源、生產(chǎn)過(guò)程微生物監(jiān)測(cè)、環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)等內(nèi)容，對(duì)國(guó)內(nèi)制藥企業(yè)在微生物監(jiān)控管理方面提出了新的要求和挑戰(zhàn)，針對(duì)客戶(hù)需求，CICC對(duì)此進(jìn)行了梳理，以方便國(guó)內(nèi)制藥企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程的微生物控制及新藥申報(bào)生產(chǎn)菌種管理方面快速理解和符合新版藥典的要求。
一、生物制品
生物制品生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)采用種子批系統(tǒng)。生產(chǎn)用菌毒種應(yīng)按各論要求進(jìn)行檢定。應(yīng)對(duì)生產(chǎn)用菌毒種已知的主要抗原表位的遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，并證明在規(guī)定的使用代次內(nèi)其遺傳性狀是穩(wěn)定的。菌毒種經(jīng)檢定后，應(yīng)根據(jù)其特性，選用凍干或適當(dāng)?shù)姆椒皶r(shí)保存。保存的菌毒種傳代或凍干均應(yīng)填寫(xiě)專(zhuān)用記錄。
生物制品各論中涉及的微生物檢定
培養(yǎng)物純度、培養(yǎng)特征、染色鏡檢、電鏡檢查、生化反應(yīng)、血清學(xué)特性、對(duì)抗生素的抗性、毒力試驗(yàn)、免疫力試驗(yàn)、免疫原性試驗(yàn)、抗原性試驗(yàn)、目的基因核苷酸序列測(cè)定、質(zhì)粒DNA檢測(cè)、質(zhì)粒拷貝數(shù)、DNA殘留、蛋白質(zhì)殘留等。
二、微生態(tài)活菌制品
生產(chǎn)用菌種應(yīng)按照“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”的有關(guān)規(guī)定建立種子批系統(tǒng)。
菌種的屬、種型分類(lèi)鑒定，應(yīng)依據(jù)最新版伯杰氏細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)（Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏細(xì)菌命名手冊(cè)(Bergey’s Manual of DeterminativeBacteriology）的有關(guān)規(guī)定，包括形態(tài)、生長(zhǎng)代謝特性檢查，原始種子或主種子還應(yīng)作遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。
三級(jí)種子批常規(guī)檢查包括培養(yǎng)特性及染色鏡檢、生化反應(yīng)、毒性試驗(yàn)，除另有規(guī)定外，原始種子或主種子批還需進(jìn)行以下檢查：細(xì)菌代謝產(chǎn)物-脂肪酸測(cè)定、遺傳特性分析、抗生素敏感性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)。
三、微生物鑒定指導(dǎo)原則（通則9204）
微生物鑒定是藥品微生物檢驗(yàn)中的重要環(huán)節(jié)，藥典附錄相應(yīng)章節(jié)中對(duì)檢出微生物的鑒定做了明確規(guī)定，如“非無(wú)菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查”（通則1106）中選擇培養(yǎng)基或指示培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)的疑似菌落需進(jìn)行鑒定；對(duì)“無(wú)菌檢查法”（通則1101）的陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果中分離的微生物進(jìn)行鑒定，以判定試驗(yàn)是否重試；藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（通則9203）中建議對(duì)潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進(jìn)行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。此外，在藥品生產(chǎn)中，有時(shí)亦需對(duì)藥物原料、輔料、制藥用水、生產(chǎn)環(huán)境、中間產(chǎn)物和終產(chǎn)品中檢出的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定。
微生物鑒定內(nèi)容包括待檢菌的分離純化、氧化酶試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)、培養(yǎng)特征、細(xì)胞特征、生理學(xué)特征、生化反應(yīng)、抗生素敏感性、血清學(xué)特征、脂肪酸、微生物毒素、全細(xì)胞組分、DNA-DNA雜交、GC摩爾百分含量、PCR反應(yīng)、16S rRNA序列、18S rRNA序列、MLST、DNA探針、核糖體分型、限制性酶切片段圖譜等。
菌株水平的鑒定在污染調(diào)查過(guò)程中非常有用，當(dāng)產(chǎn)品中的微生物數(shù)量高于建議水平或出現(xiàn)異常高的微生物檢出率時(shí)尤其適用。菌株水平的鑒定在無(wú)菌工藝中也很重要，在無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性和培養(yǎng)基灌裝等模擬工藝失敗時(shí)，必須對(duì)檢出的微生物進(jìn)行評(píng)估。菌株水平鑒定技術(shù)方法包括限制性核酸內(nèi)切酶酶解、Southern雜交、PFGE、全基因組測(cè)序、血清型等。
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