致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)中使用三糖鐵瓊脂的注意事項(xiàng)！
小楊 / 2026-01-04 09:36:50
百歐博偉生物：在
致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)中，使用
三糖鐵瓊脂（TSI）的注意事項(xiàng)需覆蓋培養(yǎng)基制備、接種操作、培養(yǎng)條件、結(jié)果判讀、質(zhì)量控制等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，具體如下：
一、培養(yǎng)基制備與儲(chǔ)存
嚴(yán)格按照配方比例稱量試劑，溶解時(shí)避免過(guò)度加熱，防止瓊脂糊化或營(yíng)養(yǎng)成分破壞；分裝試管時(shí)需控制高度，一般斜面長(zhǎng)度約占試管的 1/2，底層深度約 2~3cm，滅菌后傾斜放置形成均勻斜面。
滅菌條件為 121℃高壓蒸汽滅菌 15min，滅菌后需快速冷卻至 50~55℃，避免斜面出現(xiàn)冷凝水；未使用的培養(yǎng)基需密封儲(chǔ)存于 2~8℃環(huán)境，保質(zhì)期內(nèi)觀察顏色變化，若酚紅由紅色變?yōu)辄S色，說(shuō)明培養(yǎng)基酸化，不可使用。
培養(yǎng)基使用前需恢復(fù)至室溫，確保斜面干燥，無(wú)冷凝水積聚，否則會(huì)影響細(xì)菌的有氧/無(wú)氧代謝環(huán)境。
二、接種操作規(guī)范
接種工具需經(jīng)滅菌處理，接種針挑取菌落時(shí)要避免雜菌污染，優(yōu)先選擇 MAC 或 EMB 平板上的單菌落。
接種時(shí)嚴(yán)格遵循“斜面劃線 + 底層穿刺”的操作順序：先在斜面頂部輕輕劃線至底部，再將接種針垂直刺入底層培養(yǎng)基中心，直達(dá)試管底部，緩慢拔出接種針，避免穿刺孔過(guò)大導(dǎo)致空氣進(jìn)入底層，干擾無(wú)氧發(fā)酵結(jié)果。
同一批次的待檢菌落需設(shè)置陰性和陽(yáng)性對(duì)照（如
大腸埃希氏菌 ATCC25922 作為陽(yáng)性對(duì)照，
沙門氏菌作為硫化氫陽(yáng)性對(duì)照），確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
三、培養(yǎng)條件控制
培養(yǎng)溫度需嚴(yán)格控制在 36℃±1℃，溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌代謝異常，過(guò)低則延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，影響酸堿反應(yīng)和硫化氫產(chǎn)生的判斷。
培養(yǎng)時(shí)間為 18~24h，不可超過(guò) 24h。若培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，斜面部分的細(xì)菌會(huì)因有氧呼吸消耗營(yíng)養(yǎng)并產(chǎn)堿，導(dǎo)致原本產(chǎn)酸的斜面重新變紅，出現(xiàn)假陰性結(jié)果；同時(shí)，長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)可能使少量硫化氫產(chǎn)生，掩蓋致瀉大腸埃希氏菌的典型反應(yīng)。
培養(yǎng)過(guò)程中試管需保持直立，避免斜面與底層培養(yǎng)基混合，確保有氧和無(wú)氧環(huán)境的分離。
四、結(jié)果判讀要點(diǎn)
觀察時(shí)間需在培養(yǎng)結(jié)束后 1h 內(nèi)完成，避免培養(yǎng)基與空氣接觸過(guò)久導(dǎo)致 pH 值變化。
致瀉大腸埃希氏菌的典型反應(yīng)為“斜面紅或黃，底層黃，無(wú)黑色沉淀”，判讀時(shí)需區(qū)分“僅發(fā)酵葡萄糖”和“發(fā)酵乳糖/蔗糖”的差異：若斜面紅、底層黃，為僅發(fā)酵葡萄糖；若斜面和底層均黃，為發(fā)酵乳糖/蔗糖，兩種情況均符合大腸埃希氏菌特征。
硫化氫產(chǎn)生的判斷需注意：黑色沉淀若僅出現(xiàn)在穿刺線周圍，可能是少量硫化氫產(chǎn)生，需結(jié)合其他生化試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)；若整個(gè)底層變黑，則可排除致瀉大腸埃希氏菌。
避免將培養(yǎng)基自身的雜質(zhì)顆粒誤認(rèn)為黑色沉淀，觀察時(shí)可借助透光法區(qū)分。
五、質(zhì)量控制與實(shí)驗(yàn)安全
每批次培養(yǎng)基需進(jìn)行性能驗(yàn)證：接種
大腸埃希氏菌 ATCC25922，應(yīng)出現(xiàn)“斜面黃、底層黃、無(wú)黑色”；接種
沙門氏菌 ATCC14028，應(yīng)出現(xiàn)“斜面紅、底層黃、有黑色”；接種不發(fā)酵糖類的細(xì)菌（如
銅綠假單胞菌），斜面和底層均為紅色，無(wú)黑色沉淀。驗(yàn)證合格后方可使用。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止交叉污染；接種后的試管需做好標(biāo)記，避免混淆樣本。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有用過(guò)的培養(yǎng)基和接種工具需經(jīng)高壓滅菌處理后再丟棄，防止病原微生物擴(kuò)散。
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