嗜鹽菌選擇性瓊脂培養(yǎng)基的使用效果及注意事項(xiàng)有哪些？
小楊 / 2025-12-26 09:16:10
嗜鹽菌選擇性瓊脂的使用效果直接受操作細(xì)節(jié)、環(huán)境條件、成分穩(wěn)定性等因素影響，以下是分維度的核心注意事項(xiàng)，覆蓋從培養(yǎng)基制備到結(jié)果判讀的全流程：
一、培養(yǎng)基制備階段
1、鹽濃度精準(zhǔn)控制
NaCl 是該培養(yǎng)基的核心選擇性成分，不同目標(biāo)嗜鹽菌的最適鹽濃度不同（如
副溶血性弧菌為 8%、
金黃色葡萄球菌為 7.5%），稱量時(shí)需使用分析天平，避免因鹽濃度偏低導(dǎo)致非嗜鹽菌污染，或濃度過高抑制目標(biāo)菌生長；溶解時(shí)需充分?jǐn)嚢柚翢o顆粒，確保平板中鹽濃度均勻。
2、滅菌與溫度管控
含膽鹽、指示劑、抗生素等不耐熱成分的配方，禁止高壓滅菌，僅需加熱煮沸至完全溶解即可；需滅菌的配方（如基礎(chǔ)瓊脂），121℃高壓滅菌 15min 后，需冷卻至 50~55℃再傾注平板（溫度過高會(huì)破壞選擇性成分，過低易導(dǎo)致瓊脂提前凝固）。
若添加補(bǔ)充劑，需待培養(yǎng)基冷卻至 50℃以下無菌操作加入，避免高溫降解補(bǔ)充劑失效。
3、平板制備與保存
傾注平板時(shí)每皿量控制在 15~20mL，厚度均勻（過薄易干裂，過厚影響菌落生長）；凝固后需在超凈臺(tái)中風(fēng)干 10~15min，去除表面水分（避免接種后菌液擴(kuò)散，無法形成單菌落）。
制備好的平板需 4℃避光密封保存，保質(zhì)期不超過 7 天；若平板出現(xiàn)干裂、霉變、渾濁或顏色異常，需廢棄。
二、樣品處理與接種階段
1、前處理的鹽環(huán)境匹配
樣品增菌液的鹽濃度需與后續(xù)選擇性培養(yǎng)基適配，避免因增菌液鹽濃度突變導(dǎo)致目標(biāo)菌活性下降；固體樣品均質(zhì)時(shí)需充分（1~2min），確保樣品與增菌液充分混合，避免局部濃度不均。
2、無菌操作要求
接種過程（涂布/劃線）需在生物安全柜中進(jìn)行，接種環(huán)、涂布棒需經(jīng)干熱/濕熱滅菌后冷卻使用；避免手部、操作臺(tái)污染平板，尤其處理臨床樣本或致病菌（如
副溶血性弧菌）時(shí)，需佩戴無菌手套、口罩，防止氣溶膠感染。
3、接種量與方式
涂布法接種量控制在 0.1mL（過量易導(dǎo)致菌落重疊，難以判讀）；劃線法需保證分區(qū)清晰，避免交叉污染。
若直接接種未經(jīng)增菌的樣品（如高鹽食品），需適當(dāng)增加接種量（如 0.2~0.5mL），但需延長風(fēng)干時(shí)間，防止菌液溢出。
三、培養(yǎng)與結(jié)果判讀階段
1、培養(yǎng)條件精準(zhǔn)性
溫度：多數(shù)嗜鹽菌的最適生長溫度為 37℃，偏差 ±2℃會(huì)導(dǎo)致菌落生長緩慢或形態(tài)異常；
氧環(huán)境：
副溶血性弧菌為微需氧菌，需采用燭缸法（5% CO?）或微需氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)，需氧條件下菌落生長不良；
金黃色葡萄球菌為需氧菌，需充足氧氣。
時(shí)間：嚴(yán)格控制培養(yǎng)時(shí)長（
副溶血性弧菌 18~24h、
金黃色葡萄球菌 24~48h），超時(shí)培養(yǎng)（＞48h）會(huì)導(dǎo)致非嗜鹽雜菌緩慢適應(yīng)高鹽環(huán)境并生長，干擾結(jié)果判讀。
2、菌落判讀的特異性
需結(jié)合培養(yǎng)基的鑒別特征（如顏色、溶血圈、卵黃反應(yīng)）判讀，避免將“非典型菌落”誤判為目標(biāo)菌（如發(fā)酵蔗糖的弧菌在副溶血性弧菌選擇培養(yǎng)基上呈黃色，需排除）；
若平板中菌落密度過高（＞300CFU / 皿），需稀釋樣品后重新接種，否則無法準(zhǔn)確計(jì)數(shù)和挑取單菌落。
四、安全與廢棄物處理
1、生物安全防護(hù)
嗜鹽菌中部分為食源性/臨床致病菌（如
副溶血性弧菌、致病性
金黃色葡萄球菌），操作后需用 75% 酒精消毒操作臺(tái)、生物安全柜；實(shí)驗(yàn)耗材（接種環(huán)、移液管、培養(yǎng)皿）需經(jīng) 121℃高壓滅菌 30min 后再丟棄，避免生物污染。
2、交叉污染規(guī)避
不同批次、不同目標(biāo)菌的培養(yǎng)基需分開存放和使用；接種不同樣品的平板需做好標(biāo)記，避免混淆；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)清理移液器、培養(yǎng)箱，防止殘留菌液污染后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
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