1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了肥料中糞大腸菌群的測(cè)定方法。
2 定義
糞大腸菌群 fecal coliforms系指一群在44.5℃±0.5℃條件能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。糞大腸菌群數(shù)為每克（毫升）肥料樣品中糞大腸菌群的最可能數(shù)（MPN）。
3 設(shè)備和材料
? 高壓蒸汽滅菌器。
? 顯微鏡。
? 恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱。
? 恒溫旋轉(zhuǎn)式搖床。
? 干燥箱。
? 天平。
? 酸度計(jì)或精密pH 試紙。
? 接種環(huán)。
? 試管（15mm×150mm）。
? 小套管（杜蘭管）。
? 移液管。
? 三角瓶。
? 培養(yǎng)皿。
? 載玻片。
? 玻璃珠。
? 酒精燈。
? 試管架。
4 培養(yǎng)基和試劑
4.1 培養(yǎng)基：遵照附錄A的規(guī)定。
4.2 革蘭氏染色液：遵照附錄B的規(guī)定。
5 檢驗(yàn)步驟
5.1 樣品稀釋
在無(wú)菌操作下稱取樣品10.0g或吸取樣品10mL，加入到帶玻璃珠的90 mL無(wú)菌水中，置于搖床上200 r/min充分振蕩30min，即成10-1稀釋液。
用無(wú)菌移液管吸取5.0 mL上述稀釋液加入到45 mL無(wú)菌水中，混勻成10-2稀釋液。這樣依次稀釋?zhuān)謩e得到10-3，10-4等濃度稀釋液（每個(gè)稀釋度須更換無(wú)菌移液管）。
5.2 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)
選取三個(gè)連續(xù)適宜稀釋液，分別吸取不同稀釋液1.0mL加入到乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，每一稀釋度接種3支發(fā)酵管，置44.5℃±0.5℃恒溫水浴或隔水式培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h±2h。如果所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則為糞大腸菌群陰性；如果有產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管，則按5.3進(jìn)行。
5.3 分離培養(yǎng)
從產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的發(fā)酵管中分別挑取發(fā)酵液在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上劃線，置36℃±1℃條件下培養(yǎng)18h～24h。
5.4 證實(shí)試驗(yàn)
從5.3分離平板上挑取可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色。染色反應(yīng)陽(yáng)性者為糞大腸菌群陰性；如果為革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌則挑取同樣菌落接種在乳糖發(fā)酵管中，置44.5℃±0.5℃條件下培養(yǎng)24h ±2h。觀察產(chǎn)氣情況，不產(chǎn)氣為糞大腸菌群陰性；產(chǎn)氣為糞大腸菌群陽(yáng)性。
5.5 結(jié)果
證實(shí)實(shí)驗(yàn)為糞大腸菌群陽(yáng)性的，根據(jù)糞大腸菌群陽(yáng)性發(fā)酵管數(shù)，查MPN檢索表，得出每克（毫升）肥料樣品中的糞大腸菌群數(shù)。