貼壁細胞(adherent cells),這類細胞的生長必須有可以貼附的支持物表面,細胞依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長,繁殖。
貼壁細胞在培養(yǎng)時要貼附于培養(yǎng)(瓶)器皿壁上,細胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展,然后開始有絲分裂,并很快進入對數(shù)生長期。
下面來了解貼壁細胞的消化的具體過程:
1、吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
2、加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
5、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
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