一、背景
菌種培養(yǎng)基用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))，成分（g/L）：胰蛋白胨：10.0；牛肉浸粉：5.0；氯化鈉：2.5；瓊脂：14.0；pH值6.4-6.6。
檢驗(yàn)原理：胰蛋白胨提供碳源和氮源;牛肉膏提供維生素和氨基酸;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;氯化鈉能維持均衡的滲透壓。
用法：稱取本品31.5克，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘備用。
蠟樣芽孢桿菌（學(xué)名：Bacillus cereus），又稱仙人掌桿菌，是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，β溶血性的桿狀細(xì)菌。
蠟樣芽孢桿菌是兼性厭氧性。與其他芽孢桿菌相同，它會(huì)產(chǎn)生防御性的內(nèi)芽孢。它的致病因子包括施普善（cereolysin）和磷脂酶C（Phospholipase C）。
菌體細(xì)胞桿狀，末端方，成短或長(zhǎng)鏈，1.0～1.2×3.0～5.0微米。產(chǎn)芽孢，芽孢圓形或柱形，中生或近中生，1.0～1.5微米，孢囊無(wú)明顯膨大。
革蘭氏陽(yáng)性，無(wú)莢膜，運(yùn)動(dòng)。菌落大，表面粗糙，扁平，不規(guī)則。菌落形態(tài)：在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，培養(yǎng)24 h，可形成圓形或近似圓形、質(zhì)地軟、無(wú)色素、稍有光澤的白色菌落(似蠟燭樣顏色)直徑5-7 mm。
在M.Y.P培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更旺盛，菌落直徑達(dá)8-10 mm，質(zhì)地更軟，挑起來(lái)呈絲狀，培養(yǎng)時(shí)間稍長(zhǎng)，菌落表面呈毛玻璃狀，并產(chǎn)生紅色色素。
在蛋白胨酵母膏平板上菌落為灰白色，不透明，表面較粗糙，似毛玻璃狀或融蠟狀，菌落較大。
蠟狀芽胞桿菌細(xì)菌對(duì)外界有害因子抵抗力強(qiáng)，分布廣，是典型的菌體細(xì)胞，有部分菌株能產(chǎn)生腸毒素，呈桿狀(約1.5μm)，有色，孢子呈橢圓形，有致嘔吐型和腹瀉型胃腸炎腸毒素兩類。
二、應(yīng)用
用于產(chǎn)細(xì)菌素蠟樣芽孢桿菌的篩選、鑒定及培養(yǎng)基優(yōu)化研究：
以金黃色葡萄球菌為指示菌，從土壤中分離篩選得到目的菌株，命名為XH25。在排除有機(jī)酸與過(guò)氧化氫實(shí)驗(yàn)以及蛋白酶K敏感試驗(yàn)后綜合推測(cè)出菌株XH25的抑菌效果可能來(lái)源于細(xì)菌素。
篩選得到的XH25菌株的各項(xiàng)生理生化測(cè)定結(jié)果顯示：革蘭氏染色試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、硝酸還原試驗(yàn)、酯酶試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、V.P試驗(yàn)、卵磷脂酶水解試驗(yàn)、酪素水解試驗(yàn)和糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)都呈陽(yáng)性，H2S試驗(yàn)呈陰性；再結(jié)合菌株XH25的16S rRNA分子鑒定通過(guò)序列比對(duì)分析、系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建，鑒定出菌株XH25為蠟樣芽孢桿菌。
采用Plackett-Burman（簡(jiǎn)稱PB）試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法（Response surface methodology，簡(jiǎn)稱RSM）對(duì)菌株XH25的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。先用Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)篩選出對(duì)細(xì)菌素產(chǎn)生有顯著影響的因素，確定影響細(xì)菌素產(chǎn)生的主要成分；然后通過(guò)最陡爬坡試驗(yàn)找出RSM設(shè)計(jì)的中心點(diǎn)；最后利用RSM分析法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。
優(yōu)化結(jié)果表明，培養(yǎng)基的最優(yōu)組合為：可溶性淀粉15.32g/L、硫酸銨6.02g/L、大豆蛋白胨12.5g/L、硫酸鎂0.25g/L、培養(yǎng)基pH6.15、溫度30℃時(shí)，抑菌圈直徑比優(yōu)化前提高了21.7%。通過(guò)模型驗(yàn)證試驗(yàn)得出實(shí)際值12.90mm與模型預(yù)測(cè)值12.76mm有很好的擬合性，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性高。
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