昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2016-09-05 15:15:27
通過細(xì)胞培養(yǎng)過程生產(chǎn)生物產(chǎn)品已成為全球生物工業(yè)的主要支柱,目前,在全世界相關(guān)生物技術(shù)產(chǎn)品中,使用細(xì)胞生產(chǎn)的已超過80%。細(xì)胞培養(yǎng)表達生產(chǎn)生物藥物產(chǎn)品的工藝已從原來的方瓶、轉(zhuǎn)瓶和滾瓶培養(yǎng)規(guī)模發(fā)展至目前萬升級的工業(yè)大規(guī)模間歇式生物反應(yīng)器,甚至是技術(shù)更新、效率更高的懸浮連續(xù)式反應(yīng)器;細(xì)胞的培養(yǎng)方式也已從過去的固著貼壁式變?yōu)閼腋∈?從間歇式發(fā)展為更先進和更高效率的懸浮連續(xù)式;培養(yǎng)介質(zhì)也從含動物血清培養(yǎng)液發(fā)展到先進的無動物蛋白培養(yǎng)液。細(xì)胞(昆蟲細(xì)胞、CHO細(xì)胞、BHK細(xì)胞、Vero細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、動物細(xì)胞等)在工程控制和優(yōu)化條件下的生物反應(yīng)器中的規(guī)模培養(yǎng),是當(dāng)前工業(yè)化生產(chǎn)各類人畜疫苗、基因治療病毒載體、重組蛋白質(zhì)和多肽類藥物、單克隆抗體和各類診斷試劑相關(guān)產(chǎn)品極為重要的手段。以昆蟲細(xì)胞為宿主生產(chǎn)病毒殺蟲劑或進行基因工程產(chǎn)品的開發(fā),是動物細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域中很有吸引力的研究方向。作為聯(lián)系研究和生產(chǎn)的一個環(huán)節(jié),昆蟲細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)正成為人們研究的熱點,傳統(tǒng)扁瓶因其體積小、使用方便而成為此類研究中最常用的培養(yǎng)裝置,但就其產(chǎn)量來說,根本不能滿足產(chǎn)業(yè)化的需求。本實驗使用轉(zhuǎn)瓶對昆蟲/桿狀病毒表達系統(tǒng)大規(guī)模表達禽流感H7HA重組目的蛋白進行了研究。結(jié)果表明:維持27.5℃,轉(zhuǎn)速150rpm,添加10μL肝素鈉,以2×10~5～2×10~6cell/mL的密度接種昆蟲細(xì)胞可通過昆蟲/桿狀病毒表達系統(tǒng)在轉(zhuǎn)瓶得到大量的具有生物學(xué)活性的目的蛋白。本實驗從溫度,轉(zhuǎn)速,添加表面活性劑,細(xì)胞接種密度等指標(biāo)對昆蟲/桿狀病毒表達系統(tǒng)規(guī)?；磉_H7HA重組目的蛋白進行了探索,并為下一步禽流感基因工程亞單位疫苗抗原產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
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