為指導和規(guī)范無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗，結(jié)合近年來在無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)GMP認證檢查和跟蹤檢查中發(fā)現(xiàn)無菌工藝模擬試驗的缺陷情況，國家食品藥品監(jiān)管總局食品藥品審核查驗中心組織起草了《無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）》（征求意見稿）和《無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）》（征求意見稿），現(xiàn)向社會公開征求意見，請于2017年5月31日前將意見和建議反饋我中心。
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無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）
（征求意見稿）
國家食品藥品監(jiān)督管理總局
食品藥品審核查驗中心
二〇一六年十月
目錄
1. 目的
2. 定義
3. 范圍
4. 原則
5. 無菌制劑生產(chǎn)工藝及模擬范圍
6. 模擬試驗方案的設(shè)計及實施過程要求
6.1. 無菌工藝模擬試驗的前提條件
6.2. 基于風險的方案設(shè)計
6.3. 模擬介質(zhì)的選擇與評價
6.4. 灌裝數(shù)量及模擬持續(xù)時間
6.5. 容器裝量
6.6. 模擬試驗方法的選擇
6.7. 最差條件的選擇
6.8. 干預
6.9. 容器規(guī)格
6.10. 培養(yǎng)與觀察
6.11. 計數(shù)與數(shù)量平衡
6.12. 環(huán)境（包括人員）監(jiān)控
6.13. 人員因素
6.14. 不同劑型應(yīng)考慮的特殊因素
6.15. 方案的實施
7. 可接受標準與結(jié)果評價
8. 污染調(diào)查及糾正措施
9. 模擬試驗的周期與再驗證
10. 無菌工藝模擬試驗的局限性
11. 術(shù)語
12. 參考文獻
無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）
1.目的
為指導和規(guī)范無菌制劑生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗，充分評價無菌制劑產(chǎn)品生產(chǎn)過程的無菌保障水平，確保無菌制劑的安全性，依據(jù)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（2010版）及附錄，制定本指南。
2.定義
本指南所述的無菌工藝模擬試驗，是指采用適當?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬制劑生產(chǎn)中無菌操作的全過程，評價該工藝無菌保障水平的一系列活動。
3.范圍
3.1. 本指南涵蓋了無菌工藝模擬試驗的基本要求、不同工藝模式的相應(yīng)要求、試驗的基本流程等內(nèi)容，適用于無菌制劑的無菌工藝驗證。
3.2. 本指南所述條款是在現(xiàn)有無菌工藝技術(shù)基礎(chǔ)上提出的相關(guān)要求，旨在規(guī)范企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗活動。在科學的基礎(chǔ)上，鼓勵新技術(shù)、新設(shè)備的引入，進一步提高無菌制劑的無菌保障水平。
4.原則
在對無菌生產(chǎn)工藝充分認知和生產(chǎn)經(jīng)驗累積的基礎(chǔ)上，應(yīng)結(jié)合工藝、設(shè)備、人員和環(huán)境等要素定期開展無菌工藝模擬試驗，以確認無菌生產(chǎn)過程的可靠性，同時也為企業(yè)及時識別風險，進而改進無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持。開展無菌工藝模擬試驗應(yīng)遵循以下原則：
4.1. 對無菌生產(chǎn)過程實施風險評估，識別生產(chǎn)過程風險點，評估結(jié)果應(yīng)在試驗方案設(shè)計時給予考慮。
4.2. 應(yīng)充分考慮硬件裝備水平與無菌風險的關(guān)聯(lián)性，結(jié)合無菌生產(chǎn)過程所涉及到的工藝、設(shè)備、人員以及操作時限等因素針對性開展模擬試驗。盡可能模擬實際無菌生產(chǎn)全過程。應(yīng)特別關(guān)注“開放”操作、人工干預等高風險過程。
4.3. 如在同一生產(chǎn)線生產(chǎn)不同劑型和容器規(guī)格的產(chǎn)品，應(yīng)考慮模擬試驗方案對各產(chǎn)品無菌工藝過程的適用性。應(yīng)對有顯著差異的無菌工藝過程開展模擬試驗。
5.無菌制劑生產(chǎn)工藝及模擬范圍
無菌生產(chǎn)工藝通常包含：經(jīng)除菌過濾或其他方法獲取無菌藥液或無菌粉末，在無菌條件下進行液體灌裝或粉末分裝，容器密封。凍干制劑在液體灌裝的基礎(chǔ)上增加了冷凍干燥過程。
無菌工藝模擬試驗應(yīng)從無菌操作的第一步開始，直至無菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。如果在產(chǎn)品制備階段采用了無菌工藝，此部分工藝也應(yīng)作為模擬驗證的一部分。對于全過程無菌生產(chǎn)（如配制后不能除菌過濾）的產(chǎn)品，無菌工藝模擬還應(yīng)涵蓋原液配制、半成品配制等無菌操作過程。企業(yè)應(yīng)根據(jù)風險評估確定無菌工藝模擬試驗的起始工序。
6.模擬試驗方案的設(shè)計及實施過程要求
模擬試驗是一個系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產(chǎn)工藝全過程，證實生產(chǎn)過程中無菌保障措施的有效性。應(yīng)從以下幾方面關(guān)注模擬試驗的設(shè)計與實施：
6.1. 無菌工藝模擬試驗的前提條件
在無菌工藝模擬實驗之前應(yīng)確認與無菌工藝相關(guān)的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)的驗證已完成，并達到了可接受的標準。
6.1.1. 工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施已按照預期完成了安裝確認、運行確認及與無菌生產(chǎn)有關(guān)的性能確認。
6.1.2. 已對工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)、輔助設(shè)施的滅菌方法完成了相應(yīng)的驗證。物料及廠房、設(shè)施所使用消毒劑及消毒方式完成了相關(guān)的驗證。
6.1.3. 已經(jīng)完成了藥液及與產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件及容器的滅菌（除菌）方法驗證。
6.1.4. 無菌生產(chǎn)區(qū)域的氣流及環(huán)境達到了設(shè)計要求，并能穩(wěn)定運行。
6.1.5. 根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)受控操作文件。
6.1.6. 參與無菌工藝模擬試驗的人員接受了藥品GMP、無菌操作、微生物知識以及實施模擬試驗的培訓。
6.1.7. 進入無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認，并采用文件或其他措施，確認了每位參與者可進入的區(qū)域和其所允許的無菌操作項目。
6.2. 基于風險的方案設(shè)計
模擬試驗方案設(shè)計應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝，盡量與實際無菌操作過程保持一致，以求試驗結(jié)果真實反映生產(chǎn)過程的無菌保障水平。
6.2.1. 無菌生產(chǎn)工藝的風險評估
無菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計基于對產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無菌保證措施的認知和經(jīng)驗的累積。設(shè)計模擬試驗方案前應(yīng)對無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風險評估，以充分識別無菌生產(chǎn)過程中潛在風險點。
6.2.2. 模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)重點考察和評估高風險的無菌操作過程。無菌生產(chǎn)工藝的暴露操作是影響最終產(chǎn)品無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉(zhuǎn)運和更換、灌裝等關(guān)鍵操作。模擬試驗方案設(shè)計應(yīng)考察以上過程無菌保證措施的有效性。
6.2.3. 證實無菌操作人員能滿足無菌生產(chǎn)要求，是實施模擬試驗的目的之一。進行模擬試驗方案設(shè)計時，應(yīng)結(jié)合工藝過程中的“開放”環(huán)節(jié)，重點考察有人員參與的關(guān)鍵操作，評價人員無菌操作素養(yǎng)和防護措施的可靠性。
6.3. 模擬介質(zhì)的選擇與評價
6.3.1. 模擬介質(zhì)的選擇
應(yīng)結(jié)合被模擬產(chǎn)品的特點以及模擬介質(zhì)的可過濾性、澄清度、滅菌方式等選擇合適的模擬介質(zhì)。不應(yīng)選擇明顯具有抑菌性的模擬介質(zhì)，以確保模擬試驗結(jié)果的可信度。通?？刹捎玫哪M介質(zhì)包括促進微生物生長的培養(yǎng)基和安慰劑。
6.3.2 培養(yǎng)基的選擇
6.3.2.1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對無菌工藝環(huán)境中源自人體的細菌、芽孢和真菌有良好的促生長效果，是無菌工藝模擬試驗常用的培養(yǎng)基。
6.3.2.2 如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲存在無氧條件，無菌操作在嚴格的厭氧環(huán)境中進行時（即氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM）。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時，需評估增加厭氧培養(yǎng)基。
6.3.2.3 用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，需評估抑菌性產(chǎn)品殘存對其促生長能力及模擬試驗結(jié)果的影響。
6.3.2.4 對于包含動物來源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源性病毒污染的風險。如BSE（可傳染性海綿腦?。?TSE（瘋牛?。┑娘L險。
6.3.3 培養(yǎng)基的配制
6.3.3.1. 模擬試驗的培養(yǎng)基應(yīng)在控制區(qū)域進行準備。需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴散，以及設(shè)備表面的殘留引發(fā)的微生物滋生。通常按照最終培養(yǎng)濃度3%的要求配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過濾。
6.3.3.2. 培養(yǎng)基在模擬試驗前應(yīng)恢復至室溫，即用型無菌液體培養(yǎng)基儲存條件和使用條件可遵循生產(chǎn)商要求。
6.3.4. 培養(yǎng)基的除菌與滅菌
6.3.4.1. 除菌過濾
在培養(yǎng)基選擇階段應(yīng)考慮其過濾性。由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過濾的濾器型號可與產(chǎn)品使用的過濾器不同。如因顆?；蛏镓撦d較大等原因引起除菌過濾器的堵塞時，可增加預過濾步驟。
需考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細菌和霉菌生長的風險，以避免微生物生長導致培養(yǎng)基過濾性能降低。針對以上情況應(yīng)進行風險評估并采取合理應(yīng)對措施。
6.3.4.2. 濕熱滅菌
6.3.4.2.1.采用在線滅菌或滅菌釜濕熱滅菌方式時，應(yīng)考慮避免受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應(yīng)對該滅菌方式進行風險評估和驗證。
6.3.4.2.2.滅菌過程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時間和溫度的建議，并對滅菌過程予以確認。確保滅菌后培養(yǎng)基的促生長能力，避免過度滅菌使培養(yǎng)基碳化造成其促生長性能的降低。為避免過度加熱可采用濕熱滅菌與除菌過濾聯(lián)合使用的方式，但均應(yīng)進行促生長能力試驗。
6.3.4.3. 輻照滅菌
使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應(yīng)在無菌環(huán)境下進行無菌配制等操作。輻照滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗證，并在產(chǎn)品質(zhì)量報告中體現(xiàn)驗證中所用的菌種和劑量等信息。
6.3.5. 培養(yǎng)基促生長能力試驗
6.3.5.1. 應(yīng)在無菌工藝模擬試驗前及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對培養(yǎng)基進行促生長能力試驗。
6.3.5.2. 促生長能力試驗使用的菌種包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）等。除標準菌株之外，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長試驗接種量應(yīng)不大于100CFU，按照中國藥典要求培養(yǎng)，以證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。
6.3.6. 其它模擬介質(zhì)的選擇及評價
6.3.6.1. 其它模擬介質(zhì)的選擇
無菌粉末產(chǎn)品及特殊劑型產(chǎn)品，如懸濁液、軟膏/乳膏/乳液/凝膠等，在無菌工藝模擬試驗中會使用其它模擬介質(zhì)，如安慰劑、賦形劑等。應(yīng)根據(jù)劑型特點、生產(chǎn)工藝及設(shè)備選擇適當?shù)哪M介質(zhì)。
模擬介質(zhì)的流動性應(yīng)類似于被模擬產(chǎn)品，易于進行灌裝/分裝等工藝操作。模擬介質(zhì)還應(yīng)具有易于滅菌，無抑菌性，易溶解等特性。常用模擬介質(zhì)有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質(zhì)的滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗證并提供相關(guān)報告，其內(nèi)容包括滅菌方式對模擬介質(zhì)特性有無不良影響，滅菌后的無菌性。模擬介質(zhì)的包裝形式應(yīng)與被模擬物的包裝形式一致。
6.3.6.2. 其它模擬介質(zhì)的評價
在使用模擬介質(zhì)前應(yīng)對其適用性進行確認，包括無菌試驗、抑菌試驗、溶解度試驗等。抑菌試驗通常使用枯草芽孢桿菌（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模擬介質(zhì)由無菌注射用水分散，然后加入到無菌培養(yǎng)基中，達到模擬工藝選用的濃度范圍。然后在每份培養(yǎng)基中接種10-100CFU。陽性對照接種到不含無菌模擬介質(zhì)的試管中，在20-25℃培養(yǎng)7天所有試管應(yīng)明顯渾濁。
6.4. 灌裝數(shù)量及模擬持續(xù)時間
6.4.1. 無菌工藝模擬灌裝數(shù)量應(yīng)足以保證評價的有效性及完成模擬方案中設(shè)計的各種干預活動。應(yīng)通過風險評估對所設(shè)計的灌裝數(shù)量、持續(xù)時間、模擬方式、預期收率作出合理說明。
6.4.2. 生產(chǎn)批量小于5000支，模擬灌裝批量至少與生產(chǎn)批量相同；產(chǎn)品的生產(chǎn)批量在5000支至10000支，模擬灌裝數(shù)量應(yīng)與產(chǎn)品實際的生產(chǎn)批量相當；大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，最低模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不得低于10000支，且一般不低于產(chǎn)品實際生產(chǎn)批量的10%。如采用密封性生產(chǎn)設(shè)備，經(jīng)評估可適當降低模擬數(shù)量。
6.5. 容器裝量
容器中培養(yǎng)基灌裝量應(yīng)考慮適宜微生物生長的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產(chǎn)品相同，通常應(yīng)能達到容器體積的1/3～1/2，即可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長，以利于對培養(yǎng)基的觀察。
6.6. 模擬試驗方法的選擇
大規(guī)模生產(chǎn)時，模擬試驗方法可采用以下幾種方式：
6.6.1. 培養(yǎng)基與空瓶切換
模擬試驗的持續(xù)時間和實際生產(chǎn)相當，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實際批量，模擬試驗在培養(yǎng)基灌裝和空瓶運行間切換。在正常生產(chǎn)條件下應(yīng)模擬灌裝足夠數(shù)量的培養(yǎng)基瓶子，以保證能夠準確反映實際生產(chǎn)的污染風險。在灌裝培養(yǎng)基期間應(yīng)模擬所有類型和規(guī)定數(shù)量的干預。模擬試驗應(yīng)包含生產(chǎn)的初始、結(jié)束階段和干預發(fā)生的時刻。在不灌裝培養(yǎng)基期間，灌裝線穿插運行空容器。該方式能全面評估人員、操作和生產(chǎn)環(huán)境。
6.6.2. 培養(yǎng)基與無菌注射用水切換
模擬試驗的持續(xù)時間和實際生產(chǎn)相當，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實際批量，模擬驗證在培養(yǎng)基灌裝和注射用水灌裝間切換。此種方式比實際生產(chǎn)更復雜，同時存在注射用水稀釋部分培養(yǎng)基導致促生長性能下降的風險，應(yīng)通過促生長試驗證明其有效性。
6.6.3. 培養(yǎng)基灌裝與設(shè)備空轉(zhuǎn)的切換
模擬試驗的持續(xù)時間和實際生產(chǎn)相當，培養(yǎng)基灌裝數(shù)量少于實際批量，模擬試驗在培養(yǎng)基灌裝和設(shè)備空轉(zhuǎn)運行間切換。應(yīng)模擬足夠數(shù)量的培養(yǎng)基產(chǎn)品，以保證能夠準確反映實際生產(chǎn)的污染風險。在灌裝培養(yǎng)基期間應(yīng)模擬所有類型和規(guī)定數(shù)量的干預。模擬試驗應(yīng)包含生產(chǎn)的初始、結(jié)束階段和干預發(fā)生的時刻，在不灌裝培養(yǎng)基期間灌裝線繼續(xù)空轉(zhuǎn)運行，模擬正常生產(chǎn)操作狀態(tài)。該方式也能全面評估人員、操作和生產(chǎn)環(huán)境。
6.6.4. 生產(chǎn)結(jié)束后模擬
在一批產(chǎn)品生產(chǎn)結(jié)束后，不經(jīng)拆卸、清潔、消毒、滅菌等工作，直接進行培養(yǎng)基灌裝。此方式仍應(yīng)對設(shè)備組裝、啟動和開始灌裝進行模擬，并有足量的培養(yǎng)基沖洗產(chǎn)品管路以除去殘留的產(chǎn)品，并通過足夠的試驗證明培養(yǎng)基的促生長特性。對微生物生長有抑制性的產(chǎn)品，應(yīng)對接觸產(chǎn)品表面的所有部件進行更換。
6.7. 最差條件的選擇
最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。為了確認無菌工藝風險控制的有效性，應(yīng)通過風險評估并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水平、人員數(shù)量和干預等因素來設(shè)計模擬試驗最差條件。包括但不限于以下方面：
6.7.1. 人員
應(yīng)充分考慮人員及其活動對無菌生產(chǎn)工藝帶來的風險，如模擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當操作人員數(shù)量減少可能導致其它方面污染風險增加時，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護人員，同時應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。
6.7.2. 工藝時間
應(yīng)適當考慮模擬實際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長時間及最長的工藝保留時限等，如設(shè)備設(shè)施、分裝容器、無菌器具滅菌后最長的放置時間等。
6.7.3. 灌裝速度
模擬試驗應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實際灌裝速度范圍，基于無菌風險的角度分析評價灌裝速度對工藝過程及其他方面的影響程度，如采用最慢的灌裝速度、最大的容器用以模擬最長暴露時間；也應(yīng)考慮采用最快的灌裝速度、最小的容器，用以模擬最大操作強度/難度。
6.7.4. 環(huán)境
模擬試驗挑戰(zhàn)的最差環(huán)境應(yīng)考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時間間隔。無菌工藝模擬試驗期間的環(huán)境及器具的消毒處理應(yīng)依據(jù)正常生產(chǎn)期間的消毒方法進行，避免消毒劑的過度使用。
6.7.5. 如是再驗證，應(yīng)考慮挑戰(zhàn)無菌生產(chǎn)周期的末端。日常生產(chǎn)中，針對微生物污染事件而制定了糾正措施。在模擬試驗時，可對糾正措施的有效性給予確認。
6.8. 干預
6.8.1. 概念
干預是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與無菌工藝生產(chǎn)的所有操作活動。干預可分為固有的干預和糾正性干預。固有干預是指常規(guī)和有計劃的無菌操作，如裝載膠塞，環(huán)境監(jiān)控，設(shè)備安裝等；糾正性干預則是指對無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子，排除卡住的膠塞，更換部件、設(shè)備故障排除、手工加塞等。
6.8.2. 原則
應(yīng)對無菌生產(chǎn)過程中各種允許的干預活動進行文件化管理，明確規(guī)定正常生產(chǎn)中允許的干預活動。模擬試驗中干預設(shè)計應(yīng)與實際的生產(chǎn)活動保持一致，模擬試驗不應(yīng)挑戰(zhàn)不合理的干預，以證明其合理性。在模擬試驗方案中應(yīng)制定干預清單和實施計劃，模擬試驗時逐一實施并記錄。
6.8.3. 模擬類型及頻次
6.8.3.1. 無菌模擬試驗方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預、糾正性干預（如維修、故障停機、設(shè)備調(diào)試）的頻次、類型及復雜程度（如簡單干預：倒瓶剔除等；復雜干預：灌裝機泵及針頭裝配、設(shè)備故障維修等）。
6.8.3.2. 固有干預及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干預一般應(yīng)在每次模擬中都實施，偶發(fā)性的干預可周期性地模擬，如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑貑ⅰo菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故障排除等。
6.8.3.3. 模擬試驗應(yīng)設(shè)計并實施足夠數(shù)量的糾正性干預，干預頻次的設(shè)計應(yīng)考慮生產(chǎn)過程按比例覆蓋模擬試驗的全過程。
6.8.3.4. 對于無菌取樣、調(diào)整裝量和重復密封過程，均應(yīng)考慮在分裝的前、中、后階段進行。
6.8.4. 人員
實施干預的人員（應(yīng)包括操作、維修人員等）應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的培訓和考核，并能按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預。標準化的、簡單的固有干預可由部分操作人員實施并據(jù)此評價其他人。對于復雜操作，如裝配灌裝機等，每個從事人員都應(yīng)在驗證過程中模擬，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常生產(chǎn)的操作條件。
6.8.5. 干預后產(chǎn)品（容器）的處理
實際工藝中如明確規(guī)定受干預影響的產(chǎn)品（容器）應(yīng)從生產(chǎn)線上剔除，在模擬試驗時也可剔除。模擬試驗時產(chǎn)生的這類產(chǎn)品（容器）可不培養(yǎng)，但不培養(yǎng)的容器應(yīng)予以記錄并評估其合理性。如在干預發(fā)生前已經(jīng)密封，在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試驗時也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評估。
6.8.6. 記錄
模擬試驗過程中的所有干預必須記錄。糾正性干預記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預的類型、位置、次數(shù)；固有干預記錄至少包括干預內(nèi)容和發(fā)生頻率。
6.9. 容器規(guī)格
一條灌裝線上有多種規(guī)格容器時，應(yīng)進行風險評估選擇模擬的容器。一般選擇最小和/或最大尺寸的容器進行培養(yǎng)基灌裝模擬試驗。當使用特定的容器/膠塞組合存在特別的操作問題，如卡瓶、卡塞，即增加干預的情況，建議單獨對其進行工藝模擬驗證。通常采用透明的容器代替不透明或棕色的容器。
6.10.培養(yǎng)與觀察
6.10.1. 培養(yǎng)前的容器檢查
模擬試驗中密封缺陷產(chǎn)品的剔除工藝應(yīng)采用日常生產(chǎn)的剔除工藝。除密封缺陷的產(chǎn)品外，其他外觀缺陷、灌裝量異常的模擬產(chǎn)品也應(yīng)進行培養(yǎng)。
6.10.2. 培養(yǎng)條件
6.10.2.1. 在培養(yǎng)前，一般應(yīng)對模擬灌裝產(chǎn)品進行顛倒、輕搖以使培養(yǎng)基接觸所有內(nèi)表面。培養(yǎng)時間至少14天，可選擇兩個溫度進行培養(yǎng)：在20℃-25℃培養(yǎng)至少7天，然后在30℃-35℃培養(yǎng)至少7天。如選擇其他培養(yǎng)計劃，應(yīng)有試驗數(shù)據(jù)支持所選培養(yǎng)條件的適用性。在整個培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。
6.10.2.2. 如實際生產(chǎn)過程中，分裝容器內(nèi)需要填充惰性氣體，在模擬試驗過程應(yīng)考慮用無菌空氣替代。替代空氣應(yīng)通過與惰性氣體相同的管道系統(tǒng)以確保完全模擬惰性氣體的使用過程。如必須采用惰性氣體用以模擬厭氧無菌工藝（氧氣濃度低于0.1%）及培養(yǎng)厭氧微生物，應(yīng)確認惰性氣體與培養(yǎng)基的組合支持相應(yīng)微生物的生長。
6.10.3. 培養(yǎng)后的檢查
培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對所有模擬灌裝產(chǎn)品逐支進行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進行目視觀察。
在培養(yǎng)期間，應(yīng)定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時應(yīng)做進一步調(diào)查。
如在培養(yǎng)后檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進行適當?shù)脑蛘{(diào)查并采取糾正措施。
當灌裝不透明的容器，應(yīng)考慮將轉(zhuǎn)移至透明容器觀察的可能性，以確保陽性容器的發(fā)現(xiàn)。
6.11.計數(shù)與數(shù)量平衡
為保證模擬試驗結(jié)果的準確性，應(yīng)對各個階段的模擬灌裝產(chǎn)品進行準確計數(shù)：包括灌裝、培養(yǎng)前檢查、培養(yǎng)后檢查的數(shù)量等。數(shù)量應(yīng)平衡，如發(fā)現(xiàn)不平衡，應(yīng)調(diào)查原因并判斷本次模擬試驗是否有效。
6.12.環(huán)境（包括人員）監(jiān)控
6.12.1. 環(huán)境監(jiān)控方案設(shè)計
應(yīng)通過風險評估確定日常生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點、取樣對象、取樣頻率、警戒和糾偏標準、實施方法等。
模擬試驗時應(yīng)與日常生產(chǎn)的環(huán)境監(jiān)控方案為基礎(chǔ)，模擬生產(chǎn)狀況，包括采樣儀器、耗材的轉(zhuǎn)移、消毒等，任何異于日常環(huán)境監(jiān)控的情況都應(yīng)有說明和記錄。
與實際生產(chǎn)工藝相比，模擬實驗中的環(huán)境監(jiān)控應(yīng)考慮增加額外的監(jiān)測環(huán)節(jié)。
6.12.2. 環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)處理
環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結(jié)果用于評估模擬生產(chǎn)過程中的環(huán)境條件是否適宜于生產(chǎn)。當模擬試驗出現(xiàn)陽性結(jié)果時，環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)可用于進行根本原因的調(diào)查。
模擬試驗時發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗成功的否決條件，是否通過試驗取決于調(diào)查的結(jié)果。環(huán)境監(jiān)測結(jié)果異常時，即使試驗結(jié)果成功，也應(yīng)進行必要的調(diào)查和糾正。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結(jié)果超出糾偏標準時無菌工藝模擬試驗依然通過，也不意味著日常生產(chǎn)可以在同等環(huán)境偏差的條件下進行。
6.13.人員因素
所有被授權(quán)在生產(chǎn)時進入無菌灌裝間的人員，包括觀察人員和維修人員，每年至少參加一次成功的無菌工藝模擬實驗，方可參與正常生產(chǎn)的無菌操作。
模擬試驗方案的設(shè)計、實施及微生物污染調(diào)查應(yīng)有具備微生物方面專業(yè)知識的人員參與。
6.14.不同劑型應(yīng)考慮的特殊因素
6.14.1. 凍干制劑
6.14.1.1. 凍干過程的進箱、凍干、出箱操作是凍干制劑無菌工藝一部分，因此應(yīng)在無菌工藝模擬試驗中模擬產(chǎn)品的凍干操作過程。冷凍可能使培養(yǎng)基捕獲的微生物受損，影響其生長，因此方案設(shè)計時應(yīng)給予考慮和評估。如影響明顯，則不推薦模擬冷凍過程。模擬凍干時，必須考慮真空度、維持時間及溫度。一定溫度下的真空度會使培養(yǎng)基沸騰，應(yīng)避免這種情況的發(fā)生。
6.14.1.2. 模擬凍干操作過程有以下兩種模式，企業(yè)應(yīng)基于風險評估設(shè)計模擬的方式。
6.14.1.2.1. 縮短維持時間模式
即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞，將容器轉(zhuǎn)移至凍干機內(nèi),在凍干機箱體內(nèi)部分抽真空，維持真空狀態(tài)的時間短于實際凍干周期，然后箱體破空（可依據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)計破空次數(shù)），在凍干機內(nèi)完全壓塞。
此模式關(guān)注了風險最大的裝載和壓塞操作，但模擬凍干的時間較短，可能導致污染風險低于正常生產(chǎn)。
6.14.1.2.2. 全程維持時間模式
即培養(yǎng)基灌裝到容器中，半壓塞，將容器轉(zhuǎn)移至凍干機內(nèi),模擬正常的生產(chǎn)的凍干時間，在凍干機箱體內(nèi)全部或部分抽真空，箱體破空，在凍干機內(nèi)完全壓塞，轉(zhuǎn)移至下道工序密封。
此種模式為全程模擬，和實際生產(chǎn)一致。但應(yīng)關(guān)注長時間真空可能導致培養(yǎng)基水分揮發(fā)過度，可能降低微生物回收率，且較為費時。
6.14.1.3. 應(yīng)基于風險評估設(shè)計模擬試驗時培養(yǎng)基在凍干機內(nèi)放置的位置。
6.14.1.4. 抽真空后，通常應(yīng)采用無菌空氣代替惰性氣體平衡腔室壓力，以利于TSB培養(yǎng)基支持微生物的生長。
6.14.2. 懸濁液
6.14.2.1. 懸濁液用于不溶性無菌產(chǎn)品，如一些抗生素、疫苗和皮質(zhì)激素。懸濁液模擬應(yīng)包含懸濁液使用的工藝及相應(yīng)的無菌操作。
6.14.2.2. 模擬程序應(yīng)該包括懸濁液生產(chǎn)的特征步驟，如賦形劑的滅菌，無菌粉末的加入和懸濁液的混合等。與液體制劑模擬差別最大之處在于無菌條件下，將無菌模擬介質(zhì)粉末加入到液體制劑過程。
6.14.2.3. 懸濁液的無菌操作與溶液制劑的無菌操作方法類似，但由于懸濁液劑型配制的步驟，會相應(yīng)增加攪拌器、緩沖罐、管路以及相應(yīng)的無菌操作等特別之處。上述步驟均應(yīng)在模擬試驗中體現(xiàn)。
6.14.3. 軟膏/乳膏/乳液/凝膠
6.14.3.1. 無菌軟膏/乳膏/乳液/凝膠與溶液或懸濁液產(chǎn)品無菌工藝模擬試驗類似。模擬過程應(yīng)涵蓋實際操作的工藝。盡量采用被模擬產(chǎn)品的工藝和無菌操作方式?？稍黾釉龀韯┑饶M介質(zhì)使其更接近被模擬產(chǎn)品特性。
6.14.3.2. 無菌軟膏的模擬通常不同于西林瓶或安瓿瓶的設(shè)備上進行。模擬的基本方法是類似于其他劑型的。
6.14.3.3. 對于軟膏/乳膏/乳液/凝膠產(chǎn)品的模擬特點在于容器的檢查時，模擬介質(zhì)的轉(zhuǎn)出觀察需要特別注意。
6.14.4. 粉末制劑（無菌粉末分裝）
6.14.4.1. 無菌產(chǎn)品配方中加入其他無菌物質(zhì)的過程應(yīng)被模擬，例如混合、研磨、分裝以及其他工序。
6.14.4.2. 粉末灌裝設(shè)備與液體灌裝設(shè)備差異很大，模擬時常包含液體和/或粉末兩種無菌工藝操作。
6.14.4.3. 陰性對照
如粉末模擬試驗用到無菌液體和無菌模擬介質(zhì)粉末兩種工藝操作，可采用單獨模擬一些液體容器作為陰性對照。
粉末無菌工藝模擬試驗中模擬介質(zhì)的模擬可能引起塵埃粒子檢測數(shù)據(jù)超標，可參考實際生產(chǎn)經(jīng)驗，記錄與分析粒子粒徑，分析粉末灌裝時是否會引起塵埃粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)浮動。
6.14.5. 其他劑型
其它一些不常見的劑型，如吸入劑、氣霧劑和植入劑等，可參考本指南提供的設(shè)計理念，以滿足這些劑型的具體要求。
6.15.方案的實施
應(yīng)依據(jù)方案，建立詳細的用于實施模擬試驗的批記錄。批記錄的格式應(yīng)與產(chǎn)品的批生產(chǎn)記錄格式相同，包括所有與試驗相關(guān)信息和操作人員確認簽字及原始記錄等。方案及批記錄應(yīng)得到質(zhì)量管理部門的批準，驗證實施過程除了嚴格按照方案及批記錄的要求執(zhí)行外，還應(yīng)關(guān)注以下幾方面的因素：
6.15.1. 產(chǎn)品容器、膠塞、接觸產(chǎn)品的設(shè)備和部件應(yīng)按SOP準備。
6.15.2. 為了便于偏差調(diào)查，可對完成密封后的模擬產(chǎn)品包裝單元進行編號，每一組編號應(yīng)能追溯到無菌工藝模擬試驗的時間及相應(yīng)的操作。
6.15.3. 應(yīng)對無菌工藝模擬試驗過程進行相應(yīng)的過程監(jiān)控，確保過程符合方案和批記錄的要求。應(yīng)詳細準確記錄模擬試驗中實施的各種干預，可采取觀察或錄像（電子采集）等技術(shù)對模擬生產(chǎn)的關(guān)鍵過程進行詳細記錄。
6.15.4. 無菌工藝模擬結(jié)束，應(yīng)對所有與培養(yǎng)接觸的設(shè)備、容器、部件及環(huán)境進行有效清潔，防止培養(yǎng)基殘留造成微生物滋生。
6.15.5. 模擬試驗的結(jié)果、評估和結(jié)論應(yīng)形成書面報告并經(jīng)質(zhì)量管理部門批準。根據(jù)實施記錄，為通過模擬驗證的人員頒發(fā)確認書并規(guī)定有效期限。
7.可接受標準與結(jié)果評價
無菌工藝模擬實驗可接受標準應(yīng)當遵循現(xiàn)行GMP無菌藥品附錄中的有關(guān)規(guī)定。
7.1出現(xiàn)任何陽性均應(yīng)進行徹底、規(guī)范的調(diào)查；在科學評估的基礎(chǔ)上采取適當?shù)募m偏措施。
7.2. 采用良好設(shè)計且受控的無菌灌裝系統(tǒng)，特別是自動化的系統(tǒng)如吹灌封、隔離器等，污染率可大幅度降低。
7.3. 即使每次模擬試驗的污染率都符合可接受標準，如果連續(xù)進行的模擬試驗批中反復出現(xiàn)陽性意味著無菌生產(chǎn)工藝存在系統(tǒng)性問題，必須得到有效解決。
8.污染調(diào)查及糾正措施
8.1. 無菌工藝模擬試驗存在污染，即意味著無菌保證可能存在問題，出現(xiàn)的任何污染樣品均應(yīng)視為偏差并徹底調(diào)查，并為改進無菌工藝提供數(shù)據(jù)支持。污染調(diào)查流程及方法應(yīng)在方案中明確規(guī)定。
8.2. 可通過查看無菌工藝模擬試驗的錄像或現(xiàn)場記錄，還原模擬試驗過程中人員操作行為、干預及設(shè)備運行等真實狀況。對無菌工藝模擬實驗實施過程相關(guān)的所有記錄進行詳細調(diào)查，并關(guān)注各種偏差、驗證、變更等。
8.3. 所有偏離原始驗證狀態(tài)情況均應(yīng)逐一評估并說明。檢查所有相關(guān)人員的培訓和資質(zhì)確認記錄。
8.4. 應(yīng)對模擬試驗中發(fā)現(xiàn)的微生物進行鑒別，以便開展污染途徑調(diào)查，并列入企業(yè)微生物菌種庫。
8.5. 調(diào)查的關(guān)鍵是查找污染來源，結(jié)合調(diào)查需要，應(yīng)制定一個完整的取樣和微生物鑒別計劃，調(diào)查過程應(yīng)有記錄并歸檔。調(diào)查結(jié)果應(yīng)形成書面報告并得到質(zhì)量管理部門的批準
8.6. 如調(diào)查找到明確的原因，應(yīng)制定糾正預防措施，并再次進行模擬試驗，以證明措施的有效性。如調(diào)查無法找到根本原因，應(yīng)對生產(chǎn)工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評估，在現(xiàn)有模擬試驗方案的基礎(chǔ)上增加取樣點和頻次，以獲得更多數(shù)據(jù)支持原因調(diào)查，同時應(yīng)適當增加試驗批次。
9.模擬試驗的周期與再驗證
9.1. 新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)之前，每班次應(yīng)當連續(xù)進行3次合格的模擬試驗，在無菌生產(chǎn)工藝中一條生產(chǎn)線存在多臺相同功能設(shè)備時，應(yīng)進行風險評估確定相關(guān)驗證次數(shù)，但每臺設(shè)備應(yīng)至少經(jīng)過一次模擬試驗。
9.2. 正常生產(chǎn)期間應(yīng)當按照每條生產(chǎn)線每班次每半年進行一次試驗，每次至少一批。對于因其它原因停產(chǎn)一定周期的生產(chǎn)線，在恢復正式生產(chǎn)前應(yīng)進行無菌工藝模擬實驗。
9.3. 空氣凈化系統(tǒng)、生產(chǎn)用設(shè)備、無菌生產(chǎn)工藝及人員重大變更，或設(shè)備的重大維修后，應(yīng)通過風險評估確定無菌工藝模擬再試驗的批次數(shù)。
9.4. 應(yīng)充分評估生產(chǎn)線的風險，在發(fā)現(xiàn)設(shè)施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測出現(xiàn)不良趨勢或無菌不合格時，也應(yīng)考慮再次進行模擬試驗。
10. 無菌工藝模擬試驗的局限性
10.1.成功的無菌工藝模擬試驗是允許正式生產(chǎn)的必要條件，但應(yīng)注意其局限性。
10.2.以現(xiàn)行藥品GMP法規(guī)要求為準則，評價無菌生產(chǎn)過程的法規(guī)符合性，低于規(guī)范要求的無菌工藝過程，不能通過模擬試驗來證實其無菌控制的合理性。
10.3.雖然可通過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗來評估無菌生產(chǎn)工藝的可靠性。但當產(chǎn)品無菌檢查出現(xiàn)陽性時，不能以模擬灌裝試驗結(jié)果，排除生產(chǎn)過程所帶來的污染可能性。
11. 術(shù)語
無菌生產(chǎn)工藝：物料、器具經(jīng)過滅菌處理，并在無菌防護下加工獲得最終產(chǎn)品，且產(chǎn)品裝入其最終容器后不再進行任何滅菌處理。
無菌工藝模擬試驗：正常生產(chǎn)的灌裝程序，用模擬介質(zhì)代替產(chǎn)品，來模擬無菌生產(chǎn)的試驗過程。
TSB（Tryptone SoyBroth Medium）：胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基，用于真菌和需氧菌培養(yǎng)。
FTM（FluidThioglycollate Medium）：液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，用于厭氧菌和需氣菌培養(yǎng)。
最差狀況: 一組條件，包括工藝限度和環(huán)境限度，也包括那些可能引起工藝或產(chǎn)品失敗的機會，但這些條件不一定會引起產(chǎn)品或工藝失敗。
好氧微生物:微生物能在新陳代謝中利用氧作為最終的電子接受體，只有在有氧的存在下微生物才能夠生長。
厭氧微生物:微生物在新陳代謝中，不能利用氧作為最終的電子接受體，只有在缺氧的存在下微生物才能夠生長。
CFU:菌落形成的個體,有單一或多個細胞形成的可見結(jié)果的微生物生長體。
陽性:在培養(yǎng)之后，測試的樣品出現(xiàn)可以明顯發(fā)現(xiàn)的微生物生長。
班次：工作和生產(chǎn)的預訂周期，通常少于12小時，工人進行換班。
12.參考文獻
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《中華人民共和國藥典》（2015版）中國醫(yī)藥科技出版社