菌落總數(shù)測定核心要求之樣品稀釋、培養(yǎng)基傾注、質(zhì)量控制
小楊 / 2026-02-07 18:40:28
一、樣品與稀釋要求
無菌操作全程：所有器皿、稀釋液、操作均需無菌，避免環(huán)境/手/空氣污染。
稀釋液：優(yōu)先用 0.85% 無菌生理鹽水 或 磷酸鹽緩沖液（PBS）。
稀釋梯度：
一般食品：10?¹ → 10?² → 10?³ 逐級稀釋
污染高：從更高稀釋度開始（如 10??）
均質(zhì)要求：
固體/半固體：均質(zhì)器 8000～10000 r/min，1～2 min
避免過度均質(zhì)導致細胞損傷
稀釋后盡快接種：≤15 min 內(nèi)完成傾注，防止菌繁殖/死亡。
二、培養(yǎng)基與傾注要求
培養(yǎng)基：平板計數(shù)瓊脂（PCA）
培養(yǎng)基溫度：傾注時 46±1℃（過高燙死菌，過低凝固不均）。
每皿傾注量：15～20 mL。
每稀釋度至少 2 塊平行平板，結(jié)果取平均值。
必須做空白對照（只加培養(yǎng)基不加樣液），用于監(jiān)控污染。
三、培養(yǎng)條件（關(guān)鍵）
溫度：36±1℃
時間：48±2 h
有氧靜置培養(yǎng)（不需 CO?、不需厭氧）
四、菌落計數(shù)與選擇要求
選擇菌落數(shù)在 30～300 CFU 之間的平板計數(shù)（最準確區(qū)間）。
若：
只有低稀釋度＜30：用＜30 的平板估算（報告“估計值”）
所有平板＞300：記錄多不可計，選菌落疏密適中的平板估算
不同稀釋度均在 30～300：取平均值
鏈狀、片狀生長：不計入，或按單個菌落估算（注明）。
菌落過小/彌散：結(jié)合經(jīng)驗判斷，必要時重新測定。
五、結(jié)果計算與報告要求
1、計算公式：
測定核心要求之樣品稀釋、培養(yǎng)基傾注、質(zhì)量控制.png)
2、結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，或按標準要求表示（如 2.1×10?）。
3、若無菌落生長：報告 ＜1× 稀釋倍數(shù)（如＜10 CFU/g），不得寫 “0”。
六、質(zhì)量控制與誤差要求
平行平板誤差：同稀釋度兩塊平板菌落數(shù)差值不得超過平均值的 10%。
培養(yǎng)基質(zhì)控：每批做陽性對照（標準菌株）+ 陰性對照。
器皿滅菌：121℃ 15 min，干熱 160℃ 2 h。
環(huán)境要求：在潔凈臺/無菌室操作，定期做沉降菌監(jiān)控。
七、常見禁止/易錯點（必記）
禁止用已凝固、有氣泡、干裂、污染的平板。
禁止超溫培養(yǎng)、超時培養(yǎng)、溫度波動大。
禁止將霉菌、酵母、擴散性菌落計入菌落總數(shù)。
禁止不同稀釋度隨意取舍，必須按 30～300 規(guī)則。
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