食品微生物檢測的標準流程之接種與培養(yǎng)及控制要點！
小楊 / 2026-01-05 10:45:05
百歐博偉生物：食品微生物檢測的標準流程以國標為核心，須遵循“樣品采集→運輸保存→前處理→接種培養(yǎng)→結果判讀→報告與質控”的閉環(huán)操作，確保結果準確、可重復與合規(guī)。以下是分步驟的詳細流程與關鍵要點：
一、前期準備與樣品采集（GB 4789.1-2016）
實驗室與人員資質：人員需經專業(yè)培訓并掌握生物安全操作，實驗室需具備無菌環(huán)境（如生物安全柜、潔凈臺）、校準設備（高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱）及合格試劑。
采樣原則與工具
無菌操作：使用滅菌容器、工具（如均質袋、采樣勺、棉簽），采樣時避免交叉污染。
代表性：按批次隨機取樣，覆蓋原料、半成品、成品及關鍵控制點（如操作臺、人員手部）。
標簽信息：記錄樣品名稱、批次、生產日期、采樣時間/地點、檢測項目、采樣人等。
采樣量：固體/半固體樣品通常取 25g，液體樣品取 25mL，環(huán)境涂抹樣按 25cm² 標準操作。
二、樣品運輸與保存（GB 4789.1-2016）
運輸時限：盡快送檢，常溫下≤4h；延遲送檢需冷藏（1–5℃），冷凍樣品需在 45℃以下快速解凍（≤15min）或 2–5℃緩慢解凍（≤18h）。
保存要求：密封避光，不得添加防腐劑，防止微生物數量變化；致病菌檢測樣品需優(yōu)先處理。
三、樣品前處理與供試液制備（GB 4789.1-2016）
1、樣品均質
固體/半固體：25g 樣品 + 225mL 無菌稀釋液（如生理鹽水、磷酸鹽緩沖液），用拍擊式均質器拍打 1–2min 或均質機 8000–10000rpm 均質 1–2min，制備 1:10 稀釋液。
液體樣品：振蕩混勻，無需均質；高粘度樣品可增加稀釋液比例或添加中和劑。
2、梯度稀釋
用 1mL 滅菌吸管吸取 1:10 稀釋液 1mL，注入 9mL 稀釋液試管，充分混勻制備 1:100 稀釋液，依此類推作 10 倍遞增稀釋，每步換用新吸管。
操作需在酒精燈火焰附近進行，避免污染；稀釋后 15min 內完成接種，防止微生物沉降或繁殖。
3、特殊樣品處理
酸性樣品（pH<4.5）：用無菌 NaOH/HCl 調 pH 至 6.8±0.2；含防腐劑樣品需添加中和劑（如硫代硫酸鈉中和氯制劑）。
四、接種與培養(yǎng)（GB 4789 系列專項標準）
1、培養(yǎng)基選擇與接種方法
檢測項目 培養(yǎng)基 接種方法 培養(yǎng)條件
菌落總數 平板計數瓊脂（PCA） 傾注法（1mL 稀釋液 + 15–20mL 培養(yǎng)基） 36±1℃，48±2h（乳及乳制品 30±1℃）
大腸菌群 乳糖膽鹽發(fā)酵管（MPN 法）、VRBA 平板 發(fā)酵管接種/平板傾注 36±1℃，24–48h
致病菌（沙門氏菌） BPW 預增菌→TTB/SC 增菌→XLD/BS 平板 增菌后劃線分離 預增菌 36±1℃ 8–18h，增菌 42±1℃ 18–24h
霉菌/酵母菌 玫瑰紅鈉瓊脂 傾注法 25–28℃，5–7 天
2、對照設置
陰性對照：僅加稀釋液，無樣品，排除試劑/環(huán)境污染。
空白對照：僅培養(yǎng)基，確認培養(yǎng)基滅菌徹底。
五、結果判讀與鑒定（GB 4789 系列專項標準）
1、菌落計數（定量指標）
選取菌落數 30–300CFU 的平板，同稀釋度兩個平板取平均值；兩稀釋度均在 30–300CFU 時，比值≤2 取均值，＞2 取低值；所有稀釋度＞300CFU 按最高稀釋度報告。
結果單位以 CFU/g 或 CFU/mL 表示，保留兩位有效數字。
2、致病菌鑒定（定性/定量）
目標菌落經革蘭氏染色、生化試驗（如氧化酶、血漿凝固酶、糖發(fā)酵）或分子生物學方法（PCR、測序）確認。
典型特征：
大腸菌群在 VRBA 平板呈紫紅色帶膽鹽沉淀環(huán)；
沙門氏菌在 XLD 平板呈無色透明帶黑色中心。
3、結果判定
定量指標：符合 GB 29921 等標準限值；定性指標：致病菌不得檢出。
六、報告與檢驗后處理（GB 4789.1-2016）
報告內容：樣品信息、檢測依據、方法、結果（定量/定性）、對照結果、判定結論、檢測日期/人員、審核人等。
樣品處理：檢驗結束后，樣品需無害化處理（如高壓滅菌）；檢出致病菌的樣品單獨處理，防止污染擴散。
七、全程質量控制要點
設備校準：定期校準培養(yǎng)箱溫度、高壓滅菌鍋壓力、移液器精度，記錄校準結果。
培養(yǎng)基與試劑質控：培養(yǎng)基配制后需做無菌試驗，確認無雜菌生長；試劑需在有效期內使用，記錄批號。
人員操作規(guī)范：定期進行人員比對實驗，控制平行樣變異系數（CV）≤10%。
數據追溯：原始記錄需包含所有關鍵參數，便于追溯與復核。
八、常見應用場景流程差異
場景 核心指標 特殊步驟
即食食品 菌落總數 + 大腸菌群 + 致病菌（
沙門氏菌、
金葡菌、
李斯特氏菌） 李斯特氏菌需 4℃增菌，30℃培養(yǎng) 5–7 天
乳制品 菌落總數（30±1℃）+ 大腸菌群 + 乳酸菌 乳及乳制品培養(yǎng)溫度調整為 30±1℃以提高準確性
罐頭食品 商業(yè)無菌檢驗（GB 4789.26-2023） 保溫觀察（36±1℃ 10 天），檢查有無脹氣、渾濁
九、常見問題與解決方案
1、菌落計數偏差大
原因：稀釋不均勻、接種量誤差、培養(yǎng)溫度波動。
解決：嚴格均質與稀釋操作，接種時雙平行樣，定期校準培養(yǎng)箱。
2、致病菌假陽性/假陰性
原因：培養(yǎng)基失效、增菌條件不當、污染。
解決：使用新鮮培養(yǎng)基，嚴格按標準控制增菌溫度/時間，設置陽性對照。
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